CAS:367-93-1| IPTG在生物检测领域中的应用

产品名称：异丙基-β-D-硫代半乳糖苷
英文名称：IPTG
CAS：    367-93-1
分子式：    C9H18O5S
货号：    Y0014
结构式：

产品简介
       异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（简称IPTG）是一种作用极强的诱导剂，由于在诱导过程中不被细菌代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。IPTG作为诱导剂常用于生物制药、酶催化技术等领域。
IPTG具体应用
       蜜蜂在维持自然生态平衡和生态农业，供给人类高营养和保健功能蜂产品的过程中扮演重要角色。但近十年来，由于各种原因，世界各地的蜜蜂大量流失，严重威胁各国的养蜂业、生态平衡和农村农业生产。蜜蜂幼虫感染的病毒主要是囊状幼虫病毒(SBV)。SBV感染中华蜜蜂时被称为中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)，CSBV使中蜂幼虫不完全蛹化且蛹内充满病毒粒子。当损害严重时，大量幼虫会因感染而死亡，同时成虫为维护蜂群的生存环境而清理病死的幼虫时也会被感染上CSBV，最终导致种群的灭绝，对养蜂产业形成无法挽回的损失。
       为了检测感染CSBV前后中蜂幼虫体内神经酰胺含量的变化，对感染CSBV病毒的中蜂幼虫体内神经酰胺含量进行检测。目前市面上，主要为检测昆虫神经酰胺的试剂盒，没有针对中蜂感染CSBV后神经酰胺含量检测的试剂盒。因此，CN117924437A专利开发了一种中蜂囊状幼虫病毒的检测试剂盒及检测方法，检测试抗体具体制备方法如下：
(1)以中华蜜蜂中性鞘磷脂酶(AcnSMase)作为关键酶；
(2)以中华蜜蜂幼虫的cDNA为模板进行AcnSMase基因扩增，获得840bp左右的核酸片段，切胶回收目的片段，连接PMD19-T克隆载体并完成转化，挑取单菌落进行菌液PCR，质粒PCR和双酶切三重验证，成功构建PMD19-T-AcnSMase，进行下一步表达载体的构建。
(3)将重组质粒与空载GST载体质粒双酶切并回收目的片段，完成连接转化后，挑选单菌落进行菌液PCR，质粒PCR和双酶切验证成功，表明成功构建重组表达载体，随后将重组质粒转入Rossetta感受态细胞，挑取单菌落进行菌液PCR筛选到阳性菌株进行后续重组蛋白的诱导表达。
(4)将表达菌株在37℃下培养7h，在OD值在0.6-0.8时加入终浓度为0.1mM的IPTG诱导8h，进行SDS-PAGE电泳分析，在58KD左右处有明显差异条带，表明重组蛋白诱导成功，对重组蛋白表达形式的检测发现，该重组蛋白主要在沉淀中以包涵体的形式存在；随后大批诱导该重组蛋白，用镍柱亲和层析纯化给蛋白，用于后续免疫小鼠，获得多克隆抗体。
本专利中的检测试剂盒用于检测中蜂病原微生物感染情况，辅助有关蜜蜂生产以及相关实验研究，与现有昆虫神经酰胺检测试剂盒相比，该试剂盒的成本更低。

参考文献
CN117929706A 一种中蜂囊状幼虫病毒的检测试剂盒及检测方法.