碱裂解技术：质粒DNA纯化的科学基石与标准范式

发布人：北京百灵威科技有限公司

发布日期:2025/8/8 18:32:05

碱裂解法作为分子生物学领域的经典技术，自诞生以来便以其高效、可靠的特性成为质粒DNA提取的黄金标准。这项技术的科学精髓在于巧妙利用DNA分子在不同pH环境下的特性差异：在碱性条件下，细菌细胞壁被破坏，染色体DNA与蛋白质发生不可逆变性的同时，环状质粒DNA因其独特的超螺旋结构得以保持完整。

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步骤操作细节主要试剂/耗材纯度/规格要求

细菌培养

37℃振荡培养12-16小时（含抗生素）

LB培养基

抗生素（如氨苄青霉素）

微生物级

≥99% (HPLC)

菌体收集

离心（4℃, 12,000 rpm, 1 min）

离心管（聚丙烯）

无菌，DNase/RNase-free

菌体重悬

加入Solution I（含RNase A），涡旋混匀

Solution I

现配现用

细胞裂解

加入Solution II，轻柔颠倒混匀（冰浴）

Solution II

现配现用

中和沉淀

加入Solution III，冰浴5分钟，离心取上清

Solution III

预冷至4℃

杂质去除

可选：苯酚-氯仿抽提或柱纯化

苯酚:氯仿:异戊醇（25:24:1）

硅胶膜纯化柱（如Qiagen）

分子生物学级

商业试剂盒

DNA沉淀

上清+异丙醇/乙醇沉淀，-20℃静置

无水乙醇

异丙醇

≥99.7%

≥99.5%

DNA洗涤

70%乙醇洗涤，离心后晾干

70%乙醇（DEPC水配制）

无RNase污染

DNA溶解

溶于TE缓冲液或ddH₂O

TE缓冲液（pH 8.0）

DNase-free

质粒检测

电泳、Nanodrop或Qubit定量

琼脂糖

EB（溴化乙锭）或替代染料

电泳级

超纯（致癌，需替代）

核心产品

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品名 CAS 货号

LB medium
LB培养基

2326877

Ampicillin sodium salt
氨苄青霉素钠

69-52-3

947040

Centrifuge tubes, 1.5 mL, amber, low retention, 500 tubes/pack
离心管

1496975

Phenol, 99%, AR
苯酚

108-95-2

957630
危化品

3-Methyl-1-butanol, 99%, SuperDry, water≤30 ppm, J&KSeal
3-甲基-1-丁醇

123-51-3

930480
危化品

Anhydrous ethanol, 99.7%, AR
无水乙醇

64-17-5

904283
危化品

Isopropanol, 99.7%, AR
异丙醇

67-63-0

937211
危化品

Ethanol, 99.7%, for analysis
乙醇

64-17-5

921327
危化品

TE Buffer (100X)
TE缓冲液

4255401

Agarose, Electrophoresis Grade
琼脂糖

9012-36-6

917815

Ethidium bromide, 95%, for bio
溴化乙啶

1239-45-8

904988

裂解试剂

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品名 CAS 货号

D-(+)-Glucose, 99%, for bio
D-(+)-葡萄糖

50-99-7

936778^促

Tris(hydroxymethyl)aminomethane, 99.5%, for analysis
三(羟甲基)氨基甲烷

77-86-1

992232

Ethylenediaminetetraacetic acid, 99%, reagent grade
乙二胺四乙酸

60-00-4

932641

Sodium hydroxide, 96%, AR flaky
氢氧化钠

1310-73-2

935116
危化品

Dodecyl sodium sulfate, 99%, for ion pair chromatography
十二烷基硫酸钠

151-21-3

953543^新

Potassium acetate, 99%, reagent grade
乙酸钾

127-08-2

222500

Acetic acid, 99.5%, AR
乙酸

64-19-7

918109
危化品

纯化增强试剂

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品名 CAS 货号

Phenol, 99%, AR
苯酚

108-95-2

957630
危化品

Chloroform-d, 99.8 atom%D, contains 0.03% v/v TMS
氘代氯仿

865-49-6

995425^促

Proteinase K, for bio, 30-40U/mg
蛋白酶 K

39450-01-6

968706

Ribonuclease A, ≥50 Kunitz units/mg
核糖核酸酶 A

9001-99-4

967022

缓冲液与储存液

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品名 CAS 货号

Tris(hydroxymethyl)aminomethane, 99.5%, for bio
三(羟甲基)氨基甲烷

77-86-1

966222^促

Ethylenediaminetetraacetic acid, 99%, reagent grade
乙二胺四乙酸

60-00-4

932641

0.1mol/L PBS phosphate buffer solution
0.1mol/L PBS磷酸盐缓冲液

9456119

Diethyl pyrocarbonate, 97%, for bio
焦碳酸二乙酯

1609-47-8

981187

相关产品

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品名 CAS 货号

Lysozyme, from chicken egg, ≥20,000 units/mg
溶菌酶

12650-88-3

302969

Triton X-114
曲拉通 X-114

9036-19-5

928383