中国科学院细胞库

支原体检测

支原体是实验室中常见的污染细胞的原核生物（Table 1）。其环状双链DNA中富含腺嘌呤和胸腺嘧啶，细胞质中含有16S和23S核糖体RNA。因支原体属于直径介于0.2-2µm的最小原核生物，形态易变，故极易通过滤膜而逃过培养液的过滤除菌步骤。又因其缺少细胞壁，所以对某些常用抗生素具有抗性。在细胞培养液中，支原体可达到107-108CFU/mL（CFU=Colony Forming Unit，是一种支原体的浓度测量单位）而不使培养液混浊及影响细胞生长。多种支原体对细胞不产生任何病变效应，使得细胞污染不易被察觉。

支原体会改变宿主细胞的结构和功能等一系列特征，造成实验结果不准。因此每一株外来细胞在进入实验室之前都应通过支原体检测，并且每个实验室都应对其培养中的细胞进行定期支原体检测。

可污染细胞的支原体种类较多，主要有Mycoplasma orale, M.hyorhinis, M.arginini和Acholeplasma laidlawii。目前已发现的支原体超过100种，这就是单一的检测方法有时会失败的原因之一。我们建议至少选择2种方法来检测支原体。   

DNA-Fingerprinting检测

用四对引物DXS52、 Apo-B、 MD17S5和D2S44监测人类来源的细胞株在传代过程中变异情况。

同工酶检测

对INNOVATIVE Chemistry的The Authentikit System进行国产化，主要使用LDH, G6PD, MDH和PEP-B四种酶，检测细胞培养过程中的种间污染。

细胞活力检测

用Nexcelom公司的Cellometer mini型细胞计数及分析系统，通过台盼蓝染色检测冻存细胞及培养细胞的浓度及活力。

内毒素检测

细菌内毒素对培养物的危害：实验证明，细菌内毒素对培养细胞（尤其是ES细胞）的生长及活性具有明显的抑制作用,且该作用具有一定的时间、剂量依赖性。 　　

细胞培养中内毒素的来源：细胞培养基中的主要天然成份---牛血清包括胎牛血清和新生牛血清是内毒素的潜在来源。我国2000年版《中国生物制品主要原辅料质控标准》中对牛血清提出比较严格的标准要求。包括蛋白质含量，细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素，支持细胞增殖检查等等。对于胚胎干细胞培养，LIF和bFGF是细菌内毒素的另一个潜在来源。 　　

细胞培养中内毒素的监控：为排除血清、LIF和bFGF中内毒素的污染，细菌内毒素检测是非常重要的。本平台只使用细菌内毒素小于1EU/ml的血清、LIF和bFGF。本平台对购进的每一批血清、LIF和bFGF都要进行内毒素检测，并向所内外科研单位提供经检测的LIF和bFGF。同时我们也为所内外科研单位提供内毒素检测服务。