胶原酶使用秘籍：保存、溶解、稀释及浓度换算

发布人：上海优宁维生物科技股份有限公司

发布日期:2024/12/27 15:15:18

如何选择胶原酶大家基本都会，但是使用的时候，又会遇到这样或者那样的问题：胶原酶怎么溶解？怎么保存？效期多久？怎么换算浓度？别急，小优来帮忙！由于不同品牌的胶原酶也会有差异，所以小优今天以Absin和Worthington的胶原酶为例教大家如何保存、溶解、稀释和进行酶浓度换算。

（ps：如果还有小伙伴不会选择适合自己实验样本的胶原酶，可以参考《组织解离酶怎么选？一文教会你！》这篇文章；优宁维作为Worthington在中国区的一级授权代理商，致力于为广大客户提供优质的酶制品，小伙伴们有相关的疑问也都可以联系我们）。

关于Absin

爱必信（上海）生物科技有限公司是一家从事生物学试剂及耗材的高新技术企业。公司秉承“为生命科学创造便利！为客户创造价值！为员工创造幸福人生！”的发展理念，拥有专业的产品研发质检团队、市场营销团队及先进仓储物流等管理团队。主要经营产品有：生化试剂（常用生化试剂、生物学实验常用试剂、荧光染料、激动剂/抑制剂，植物提取物）、细胞生物学（细胞培养产品、血清、基质胶、添加剂、检测试剂盒）、免疫学产品、分子生物学产品、实验室仪器/耗材、产品定制和检测服务。

关于Worthington

Worthington Biochemical Corporation，1947年成立于新泽西州弗里霍尔德，是专业的酶和生物化学品制造商，其生产的高质量纯化酶、蛋白质、核酸及细胞分离试剂盒广泛用于生命科学研究、原代和干细胞分离、生物加工、生物制药、诊断和生物技术应用。凭借超75年的专业积淀，Worthington拥有全面的生命科学酶资源库，包括参考手册和广泛引用的全球知名同行评审期刊。

写在前面

由于蛋白酶测定的底物不同，酶活单位也会有所不同。

CDU/mg：酪蛋白消化单位 Casein Digestion Unit

GDU/g：明胶消化单位 Gelatin Digestion Unit

Absin胶原酶篇

1. 外观：棕褐色或淡褐色粉末

1. 保存：干粉一般2-8℃避光干燥储存，也可置于-20℃长期保存。溶解后的胶原酶应于-20℃分装避光保存，同时避免反复冻融。

2. 溶解：使用含有钙镁的HBSS缓冲液，轻轻涡旋振荡确保完全溶解混匀。储备液酶浓度一般为100u/ml，溶解后使用低蛋白结合性的0.22μm滤膜进行无菌过滤，按需分装避光保存于20℃。

3. 稀释：使用前置于冰上融化，避免反复冻融。建议胶原酶的工作浓度为0.5-2mg/ml，具体使用浓度请根据消化对象或参考文献来调整。稀释所使用的介质可以是DMEM、PBS、HBSS等，具体使用何种介质可以参考文献。

2. 胶原酶浓度（mg/ml和U/ml）换算

需要根据产品批次查到其CoA，比如abs47048000-100mg（胶原酶I型，100mg）的某个批次，CoA里面胶原蛋白（unit/mg solid）=300，意思是当测定底物是胶原蛋白时，每mg干重含有的酶活为300units，如果我们的实验底物也是胶原蛋白，那300这个数字就是准确的，如果是其他底物需要对应的酶活数值来计算。假设我们现在底物是胶原蛋白，需要配置1ml的储备酶浓度1000u/ml，则需要称取1000units÷300units/mg≈3.33mg干粉，溶于1ml含有钙镁的HBSS缓冲液即可。

文中部分相关产品

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产品名称

货号

规格

胶原酶 I型

100mg

胶原酶 II型

100mg

胶原酶 III型

100mg

胶原酶 Ⅳ型

100mg

Worthington胶原酶篇

3. 保存：干粉一般2-8℃避光干燥储存。溶解后的胶原酶应于-20℃或-80℃分装避光保存，同时避免反复冻融。

4. 溶解：溶解前的干粉应置于室温，胶原酶溶解通常使用平衡盐溶液，如Hank 's，Earle 's或其他盐溶液，轻轻旋涡震荡使其充分溶解。溶解后的最佳pH范围为7-9。室温溶解后的胶原酶溶液应通过低蛋白结合性的0.22μm滤膜进行无菌过滤，并分装保存于-20℃或-80℃，避免反复冻融，使用前置于冰上融化。

注意：

1) 半胱氨酸、EDTA或邻菲咯啉等金属螯合剂可抑制部分纯化的胶原酶活性，但去铁酮DFP不能。α2巨球蛋白（一种大的血浆糖蛋白）也能够抑制胶原酶活性。

2) Ca2+是酶活性所必需的，胶原酶溶液在0.3-0.5mM钙离子PH7.4的条件下可以在37℃维持活性5小时，在-20℃可维持数月。

5. 稀释

因为稀释后的酶不稳定，所以建议储存的酶浓度在1mg/ml或更高为宜，同时也要避免反复冻融。稀释所使用的介质可以是DMEM、PBS、HBSS等，具体使用何种介质可以参考worthington组织分离指南和文献。

6. 胶原酶浓度（mg/ml和U/ml）换算

需要根据产品批次查到其CoA，在CoA里面有一个u/mg dw的数值，意思是每mg干重含有的酶活是多少。下面举两个例子帮助大家理解：

1) 产品规格是g，需要配置u/ml的酶溶液

比如LS004196（Collagenase Type 1，1g）现有一个批次的CoA里面是320（下图），也就是每mg干重含有酶活320 units，产品规格是1g，如果要配置500u/ml，就要取500units÷320u/mg＝1.5625mg，溶于1ml溶剂中即可。

2) 产品规格是ku，需要配置mg/ml或者u/ml的酶溶液

比如LS002425（Deoxyribonuclease II，80ku）现有一个批次的CoA里面是855（下图），也就是每mg干重含有酶活855 units，产品的规格是80ku，一共是80000units÷855 u/mg=93.6 mg，然后就可以称重对应质量的干粉配制mg/ml的酶溶液了。如果要配制20000u/ml的酶溶液就要取20000units÷855 u/mg=23.4 mg，溶于1ml溶剂里面即可。