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高纯度、催化活性的Top1酶在杆状病毒系统中过表达，并纯化至单带均一性。这些制剂比由人体组织制成的天然拓扑异构酶I便宜，纯度高，比活性高。

艾美捷TopoGEN人拓扑异构酶I酶：

SKU：TG2005HRC

类别：拓扑异构酶

标签：人拓扑异构酶1

高纯度、具有催化活性的人拓扑异构酶I酶在杆状病毒系统中过表达并纯化至单一条带均一性。这些制剂比从人体组织中提取的天然拓扑异构酶I便宜，并且提供出色的纯度和高比活性。此外，重组拓扑异构酶I的100 kDa形式稳定，相对于人体细胞中的天然蛋白，更不易受到蛋白酶的降解。

拓扑异构酶I的最终制剂在松弛质粒DNA方面非常活跃。

人拓扑异构酶I酶活性的滴定：

使用杆状病毒过表达系统制备和纯化拓扑异构酶I。通过连续2倍稀释使用超螺旋DNA来确定活性。数据显示，这种制剂大约滴定到8单位/微升。一个人拓扑异构酶I单位可以在37°C下30分钟内松弛超过50%的0.25微克（250纳克）超螺旋质粒DNA。

包含材料

包含10X反应缓冲液和稀释缓冲液。这些可以单独购买，作为TGS 10X拓扑异构酶I反应缓冲液（TG4095）。

质量控制测试：

1. 经认证，人拓扑异构酶I无核酸酶污染。

2. 与拓扑异构酶II的交叉污染检查结果为阴性。在拓扑异构酶II反应条件下，没有KDNA的解连环。

3. 拓扑异构酶I的最终分数是柱池，并且含有以下缓冲液：20mM NaH2PO4（pH7.4），300mM NaCl，50ug/ml BSA，50%甘油，50mM Imidazole。最终分数通过SDS-PAGE分析，显示含有一个主要的100 kDa单一条带。

4. 活性测定。在最终体积为25微升的top1反应缓冲液中进行松弛测定（10X反应缓冲液——也称为TGS——随本产品提供：100 mM Tris-Cl（pH 7.9），10 mM EDTA，1.5 M NaCl，1% BSA，1 mM Spermine，50%甘油）。每个反应包含0.25微克超螺旋质粒DNA。反应用5微升（每20微升反应体积）的停止缓冲液（5%十二烷基硫酸钠，0.0025%溴酚蓝，25%甘油）终止。反应产物在1%的原生琼脂糖凝胶上分析（电泳过程中凝胶或缓冲液中不含乙酰胺）。

人拓扑异构酶I酶在干冰上运输，应储存在-20°C。在最佳储存条件下，其寿命约为6个月。反复的冻融循环会加速活性损失。

TopoGEN人拓扑异构酶I酶文献：

Yoshizaki A, Yanaba K, Ogawa A, Asano Y, Kadono T, Sato S: Immunization With DNA Topoisomerase I and Freund’s Complete Adjuvant Induces Skin and Lung Fibrosis and Autoimmunity via Interleukin-6 Signaling.  Arthritis and Rheumatism 2011, 63: 3575-3585.  doi: 10.1002/art.30539.

Zhang L, Sullivan P, Suyama J, et. al: Epidermal growth factor-induced heparanase nucleolar localization augments DNA topoisomerase I activity in brain metastatic breast cancer.  Molecular Cancer Research 2010, 8: 278-290. doi: 10.1158/1541-7786.MCR-09-0375

作为TopoGEN在中国的代理商，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的TopoGEN以及客户订制化服务。

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