上海雅吉生物科技有限公司

病毒DNA/RNA提取试剂盒使用说明书http://www.yajimall.com/

【产品名称】

通用名称：病毒DNA/RNA提取试剂盒

英文名称：Viral DNA/RNA Acid Extraction Kit

【包装规格】 50T/盒

【预期用途】

本产品适合于从血清、血浆、牛奶、体液、培养液、组织匀浆液、拭子等样品中提取病毒RNA或DNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，也无需进行耗时的醇类沉淀。获得的DNA/RNA可直接用于RT-PCR、PCR、Northern杂交、以及各种病毒检测等。

【主要组成成份】

【储存条件及有效期】 

本产品部分组份保存于室温(15-25℃)，有效期12个月，长期保存时需置于2-8℃；蛋白酶K保存于2-8℃,长期保存时需置于-20℃，有效期12个月。（收到试剂盒后将蛋白酶K保存于-20℃）

【注意事项】

1. 自备无水乙醇(96-100%)、自备离心管；裂解液避免长期与空气接触，易挥发；
2. 为避免其他核酸的污染，必须使用不含DNA和RNA的离心管、吸管、枪头、试剂和手套，操作人员须戴口罩；
3. 避免反复冻融蛋白酶 K，会影响其活性.

【操作步骤】 

1. 转移20 µl 蛋白酶K至1.5ml离心管中。
2. 转移200 µl样品,如血清、血浆、尿液、培养液上清、或其它无细胞体液至装有蛋白酶K的离心管中,震荡混匀5s。若样品不足200µl，用Buffer PBS或无核酶水补足。（咽/口腔拭子，或固体组织样品先用Buffer PBS浸泡或匀浆后,离心取上清进行操作。）
3. 加入250µl 裂解液 至步骤2的混合液中,涡旋混匀15s,室温静置3-5min。
4. 加入250µl无水乙醇 至步骤3的混合液中,涡旋混匀15s,室温静置1min。
5. 把 纯化柱 装在2ml收集管中，转移步骤4的混合液至纯化柱中。12000rpm离心1min。
6. 倒弃滤液把纯化柱装回收集管中,加入650 µl 洗涤液 至纯化柱中,12000rpm离心1min。
7. 按照步骤6重复一次。
8. 倒弃滤液把纯化柱套回收集管,12000rpm离心空柱2min甩干纯化柱。
9. 将纯化柱转移至新的1.5ml离心管,加入50µl 洗脱液至纯化柱的膜中央，室温静置1min，12000rpm离心1min。离心管中即为所提取的样品DNA/RNA。

【常见问题】

1. 纯化柱堵塞

1. 样品用量太多：处理动物抗凝血液时，样品量控制在100-150µl。尽量使用无细胞的样品，如血浆、血清、组织匀浆液的上清等。
2. 蛋白酶 K活性下降：重新制备蛋白酶 K。使用后蛋白酶 K必须保存于-20℃，避免反复冻融。蛋白酶 K与裂解液不能预先混合。
3. 样品含固体颗粒：在第4步加入乙醇前，12000rpm离心3min去除未消化的杂质，转移上清液至新的离心管后再加入乙醇。
4. 样品裂解不充分：样品与裂解液混匀不充分。重新提取，加入裂解液后先颠倒混匀3-5次，然后以最高速度涡旋让样品与裂解液充分混匀。

2. 下游应用结果不理想

1. 样品被反复解冻： 避免反复冻溶样品。推荐使用新鲜样品或只解冻过一次的样品。
2. 蛋白酶K活性下降：更换蛋白酶K。使用后蛋白酶 K必须立即保存于-20℃，避免反复冻融。
3. 洗脱液被污染：更换新的洗脱液或DEPC处理水。
4. 乙醇残留：柱子在洗脱前，需要空甩去除乙醇。对于敏感的应用，柱子在洗脱后，打开柱子的盖子，放置10-15min让乙醇彻底挥发。
5. 洗脱效率：处理富含DNA的样品时，把洗脱液预热至55℃后再进行洗脱，有利于提高DNA得率。