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核糖核酸酶A:大自然的RNA剪刀手!

发布人:江苏金普诺安生物科技股份有限公司

发布日期:2024/7/18 9:23:24

 

核糖核酸酶(RNase)在生物体内起着重要的作用,几乎可以从任何一种原核生物与真核生物细胞中找到它的存在。它们具有降解和分解核糖核酸(RNA)分子的能力,参与调控细胞内的RNA代谢和功能调节。根据其结构和功能特点,核糖核酸酶可以分为多个分类,如核糖核酸酶P(RNase P)、核糖核酸酶L(RNase L)等。

 

图源pixabay

 

核糖核酸酶A(RNase A)是核糖核酸酶家族中具代表性的成员之一。它早期从牛胰腺组织中分离得到,并被广泛研究。RNase A具有高度特异性和高效性的RNA降解能力,通过切割RNA分子来调控细胞内的RNA代谢功能。

 

【NO.1 诺贝尔奖与核糖核酸酶A

对于生物化学专业的人来说Anfinsen经典的核糖核酸酶变性和自复性实验想必并不陌生。安芬森(Christian B. Anfinsen),美国生物化学家,因对核糖核酸酶,特别是氨基酸序列与其生物活性构象之间关系的研究与摩尔(Stanford Moore)、施泰因(William H. Stein)共享1972年诺贝尔化学奖。

 

Anfinsen |图源:nobelprize.org

 

牛胰核糖核酸酶A能够被高浓度尿素和还原剂(巯基乙醇)彻底地变性。还原剂打开了核糖核酸酶分子内部4对二硫键的共价连接,尿素破坏了维系蛋白质结构的疏水相互作用,从而将酶从其稳定结构变性为伸展的多肽链。蛋白质的结构是其活性和功能的前提,所以完全伸展的核糖核酸酶多肽链彻底丧失了催化活力。但是,当从反应体系中去除尿素和还原剂后,完全变性的多肽链会自发地重新折叠形成天然的构象,同时恢复其催化活力。在这个复性过程中,酶分子的8个半胱氨酸残基必须形成其天然构象中原有的4对二硫键。从数学概率计算,8个半胱氨酸残基随机配对形成4对二硫键的组合共有105种,形成天然构象中的4对二硫键形式的概率是1/105。

 

在安芬森这一实验中,多肽链没有依靠任何其他辅助因素就找到了这1/105可能的天然构象,说明尿素破坏的蛋白质分子内部的弱相互作用对二硫键的正确形成以及天然构象的实现至关重要。正是基于这一经典实验,安芬森提出多肽链氨基酸序列含有其三维结构的全部信息。安芬森的工作开创了近代蛋白质折叠研究的新时代,这个著名的实验也被载入世界上多本经典生物化学教科书。

 

【NO.2 结构与功能

RNase A是一种核糖核酸内切酶,可以特异地攻击RNA上嘧啶残基的3'端,切割与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键。反应终产物是嘧啶-3'-磷酸及末端带嘧啶-3'-磷酸的寡核苷酸。

 

应用

· 去除DNA或蛋白质样品的RNA污染

· 为DNA纯化提供支持

· RNA检测- RNA酶保护分析法中应用

 

RNase A 作用于单链RNA时,表现较高作用效果。推荐工作浓度为10-20μg/mL,兼容于各种反应体系。

 

【NO.3 金普诺安|核糖核酸酶A

 

金普诺安自主研发生产的核糖核酸酶A(Ribonuclease A/RNase A)是经过蛋白质工程技术改造的源于牛胰腺(bovine pancreas)的非特异性核糖核酸内切酶,经过酵母表达、纯化获得。它不含有原核生物表达的细菌内毒素。

 

订购信息

 

【NO.4 产品信息

1.纯度验证

 

 

结果显示:经SDS-PAGE验证,核糖核酸酶A纯度≥90%。

 

 

2.蛋白酶污染检测

样品与蛋白标记物在37℃下孵育16小时,并通过SDS-PAGE进行评估:

结果显示:在可检测范围内,金普诺安核糖核酸酶A未检测到蛋白酶活性。

 

3.适配温度检测

结果显示:温度范围在15-70℃期间都具有酶活性,在60℃时达到活性高峰。

 

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