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发布人:上海雅吉生物科技有限公司
发布日期:2024/6/28 8:15:33
葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)http://www.yajimall.com/article/aboutus.html
一、产品简介:
葡萄糖(Glucose,Dextrose,Glu)又称玉米葡糖,简称葡糖,化学式C6H12O6,分子量为180.16,是自然界分布最广、最重要的一种单糖,属于多羟基醛,用酶学方法测定葡萄糖是生化检测中的常用方法,最常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法,
上述酶学法特点是:
1、灵敏度、准确度、精密度均高;
2、使用温和的反应条件;
3、对葡萄糖有专一性,不受其他糖及还原物的干扰;
4、操作简便;
5、适用于自动分析仪。
雅吉生物葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)又称葡萄糖氧化酶法或葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法等,其检测原理是在葡萄糖氧化酶的催化下,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸,同时消耗溶液中的氧,产生的过氧化氢与氧化色原物质反应生成红色的醌类化合物,初始反应中过氧化氢的生成量与葡萄糖浓度成正比,分光光度计505nm进行比色测定,专门用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的葡萄糖含量定量测定,但不宜直接检测尿液中的葡萄糖含量,其中Glu标准(5mmol/L)=90mg/dl。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。。
二、产品组成:
名称规格
100ml
存储
试剂(A):酚试剂
100ml
RT避光
试剂(B):酶试剂
磷酸盐、4-AAP、GOD、POD
100ml
-20℃避光
临用前,酚试剂:酶试剂等比例混匀,即GOD-POD工作液,4℃保存。
试剂(C):Glu标准(5mmol/L)
1.5ml
4℃
试剂(D):ddH2O
1.5ml
RT
使用说明书
一份
三、自备材料:
1、生理盐水或PBS
2、离心管或96孔板
3、匀浆机、离心机
4、水浴锅或恒温箱
5、分光光度计、酶标仪、全自动或半自动生化分析仪
四、操作步骤(仅供参考):
1、样本处理:
①血清、血浆、脑脊液样品:从待测样品中分离出的血清或血浆不应有溶血,直接测定,如超过线性范围(30mmol/L),用生理盐水或PBS稀释后测定。
②细胞样品:
a.取适量的细胞(一般推荐>106以上),1000g离心10min,弃上清,留取沉淀。b.用PBS或生理盐水清洗1~2次,1000g离心10min,弃上清,留取沉淀。
c.加入200~300μl的PBS或生理盐水匀浆,冰浴条件下超声破碎细胞,功率300W,每次3~5s,间隔30s,重复3~5次;亦可手动匀浆,制备好的匀浆液不可离心;亦可用1~2%TritonX-100冰浴30~60min,制备好的裂解液不可离心。
③组织样品:准确称取适量组织样品,按质量(g):生理盐水或PBS(ml)=1:9的比例,加入生理盐水或PBS,冰浴条件下手动或机械匀浆,2500~3000g离心10min,取上清。
酶标仪、全自动生化分析仪Glu测定
加入物(μl)
空白孔
标准孔
测定孔
ddH2O
3
-
-
Glu标准(5mmol/L)
-
3
-
待测样品
-
-
3
GOD-POD工作液
300
300
300
分光光度计(1ml比色杯)、半自动生化分析仪Glu测定
加入物(ml)
空白管
标准管
测定管
ddH2O
0.01
-
-
Glu标准(5mmol/L)
-
0.01
-
待测样品
-
-
0.01
GOD-POD工作液
1
1
1
普通分光光度计(2ml比色杯)Glu测定
加入物(ml)
空白管
标准管
测定管
ddH2O
0.02
-
-
Glu标准(5mmol/L)
-
0.02
-
待测样品
-
-
0.02
GOD-POD工作液
2
2
2
①各种仪器按上表依次加入试剂。
②充分混匀,37℃水浴中孵育15min。
③立即用相应仪器测定505nm处吸光度,以空白孔(管)调零,读取标准孔(管)、测定孔(管)的吸光度,分别记为A标准、A测定。
机器参数:
主波长
505nm
反应类型
终点法
反应方向
升反应(+)
计算:Glu(mmol/L)=A测定/A标准×5
参考区间:健康成年人空腹葡萄糖:3.9~6.1mmol/L(70~110mg/dl)
备注:Glu标准(5mmol/L)=90mg/dl
性能指标:
外观
无色至淡黄色澄清液体
线性范围
0~30mmol/L,r>0.990
变异系数
批内<2~5%,批间<5%
空白吸光值
<0.2(1cm光径)
稳定性
密闭,6个月
注意事项:
1、配制好的GOD-POD工作液,4℃避光保存,1月有效;低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降。
2、测定标本用血清或以草酸钾-氟化钠抗凝的血浆(可抑制葡萄糖的分解),可直接用于检测脑脊液中的葡萄糖含量;待测样品如不能及时测定应置于2~8℃保存,3天内稳定。
3、尿葡萄糖目前多采用此法进行定量测定,但不能直接检测,需先用班氏法对尿液样品做半定量试验,按测出的大概含量,用蒸馏水稀释尿液使葡萄糖含量在3mg/ml以下,再进行检测,计算结果乘以稀释倍数即可,因为未经处理的尿液中尿酸等还原性物质的浓度较高,影响过氧化物酶反应,可能会造成结果假性偏低。
4、随着时间的延长,低浓度样品亦会显红色,所以15min后应及时检测,时间不宜过久。
5、采用酶标仪未调零情况下雅吉生物空白参考范围在0.04~0.09之间,5mmol/L标准参考范围在0.25~0.45之间,由于仪器设备、操作方法等不同,参考范围会有差异。
6、该试剂盒测定下限为0.1mmol/L,测定上限为30mmol/L;以肉眼观察,浓度≤
0.6mmol/L几乎呈无色,浓度在0.7mmol/L即可显淡红色,浓度≥2.5mmol/L可显红色,一般情况下接近上限比接近下限更准确。
7、本法线性范围可达30mmol/L,如果样品葡萄糖浓度过高,结果可能呈假性降低,应用生理盐水或PBS等稀释后重测,结果乘以稀释倍数。
有效期:6个月有效。
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