3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）是一种新型安全的色原试剂；TMB已在逐步取代强致癌物联苯胺和其他致癌性的联苯胺衍生物，应用于临床化验、法医检验、刑事侦破及环境监测等领域；尤其是在临床生化检验方面，TMB作为过氧化酶的新底物，在酶免疫分析法（EIA）和酶联免疫吸附检验法（ELISA）中获得了广泛的应用；主要应用于如下项目:潜血指纹检测；唾液中酒精的快速检测；尿联试纸的配制；肝炎病毒检测；妊娠检测试验；血液和尿液中葡萄糖、血红蛋白、白蛋白的快速测定；粪便隐血试验；血液中粒细胞值的测定、类固醇、性激素的检测；酶活性的测定；抗原、抗体及遗传物质的分析、检测；生物样品的染色；水质检测(余氯、亚硝酸盐等)。
配制方法：①醋酸缓冲液：取1.0 mol/L HCI 190 ml，加入1.0 mol/L醋酸钠400 ml中混 合，再加蒸馏水稀释至1 000 ml，用醋酸或NaOH将pH调至3.3。②A液：取上述缓冲液5 ml， 溶解100 mg亚硝基铁氰化钾，加蒸馏水92.5 ml混合;③B液：称取5 mg TMB加入2.5 ml无水 乙醇中，可加热至37℃～40℃直到TMB完全溶解;④孵育液：放入标本前数秒，取2.5 ml B液及 97.5 ml A液于试管中充分混合。(液体在20 min内应保持亮的黄绿色，否则可能已有污染)。 加入终浓度为0.05 %的H2O2;⑤主要显色步骤：组织标本在蒸馏水(或PBS)中漂洗数次(每次 10～15min)后放入未加H2O2的孵育液中作用20 min(19～23℃)，然后向孵育液中加入H2O2 (每100 ml孵育液中加0.3%的H2O21.0～5.0 ml)继续孵育20 min左右(19～23℃)，取出切片 必须漂洗数次(总计30 min)。在0～4℃条件下切片可在漂洗液内放置4 h，直至封片。
TMB是一种脂溶性较强的基团，因此容易进入细胞或细胞器中与AHP的反应，且由于这种高度的脂溶性，使其容易形成多聚体，在HRP活性部位产生粗大的，深蓝色沉淀物，这使 得TMB成为免疫组化实验中的一种很好的发色团，同时反应产物的沉淀，使得HRP的活性 部位更加暴露，有利于酶氧化反应的进行。TMB的反应产物为深蓝色，利于光镜观察，且反应 产物越聚越大，常超出单个细胞器的范围(而DAB则被限制在其内)。由于上述优点，目前 TMB常用于光镜及超微结构水平的HRP及HRP-WGA神经投射的研究。人们需要注意 的是，TMB显色液中的A液和B液应在2 h内新鲜配制，另外，TMB是一种较强的皮肤刺激剂，并有致癌的潜在可能，故使用时应带手套及在通风条件下操作。