阿尔玛蓝试剂

阿尔玛蓝（Alamar Blue，阿尔玛兰）是一种细胞活力检测试剂，包含一种具细胞膜渗透性、无毒性且弱蓝色荧光的指示剂刃天青（resazurin）。阿尔玛蓝是目前的细胞增殖和细胞毒性检测试剂之一，以其低毒性安全，操作灵活简单，灵敏度高，适用细胞范围广等优点被越来越多的科研工作者所认可。阿尔玛蓝包含一种具细胞膜渗透性、无毒性且弱蓝色荧光的指示剂，即刃天青（resazurin）。刃天青是一种氧化还原（REDOX）指示剂，根据细胞代谢还原情况发生颜色变化。氧化态的刃天青呈紫蓝色且基本无荧光，其还原态产物试卤灵（resorufin）转变为粉红色且发荧光，其激发光波长在530-560 nm之间,发射光波长为590 nm。 刃天青是一种氧化还原指示剂，根据细胞代谢还原情况发生颜色变化。氧化态的刃天青呈紫蓝色且基本无荧光，其还原态产物试卤灵（resorufin）转变为粉红色且高度荧光，产生的荧光强度与呼吸活细胞数量呈正比。阿尔玛蓝的颜色变化可通过普通分光光度计检测吸光度变化，检测波长为570nm，参考波长为600nm；阿尔玛蓝的荧光变化可通过荧光光度计检测，激发波长在530~560nm之间，发射波长为590nm。 1、还原态的Alamar Blue在水或水溶性缓冲液如PBS中很不稳定，但在培养基内非常稳定。为了确定特定实验还原态Alamar Blue的吸光度/荧光值，需准备100%还原态Alamar Blue试剂：将Alamar Blue与细胞培养基按照1:10的比例混合，高压灭菌15min即可。
2、适宜的细胞密度能够增加检测灵敏度。对于96孔板，建议每孔接种100μl细胞，细胞浓度范围：贴壁细胞为100-10,000个/孔，悬浮细胞在2,000-50,000个/孔，以培养基为空白对照。对于384孔板，细胞浓度和接种量均减半。
3、影响细胞对Alamar Blue反应的两大变量为孵育时间和铺板密度，建议实验前需先摸索优化这两个因素。细胞密度过高或孵育时间过长都会导致继发性还原反应，红色产物停止增加并开始衰减，导致吸光度/荧光水平明显下跌并伴随红色消失。
4、微生物污染会还原Alamar Blue。因此对被污染细胞使用Alamar Blue检测会引起错误结果。
5、Alamar Blue可以用分光光度计或荧光计检测，但荧光灵敏度高，实验误差小，推荐荧光检测。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。