检测试剂 检测原理 注意事项

阿尔玛蓝试剂

阿尔玛蓝试剂,,结构式
阿尔玛蓝试剂
  • CAS号:
  • 英文名:Alamar Blue Cell Viability Assay Reagent
  • 中文名:阿尔玛蓝试剂
  • CBNumber:CB913273034
  • 分子式:
  • 分子量:0
  • MOL File:Mol file

阿尔玛蓝试剂性质、用途与生产工艺

  • 检测试剂 阿尔玛蓝(Alamar Blue,阿尔玛兰)是一种细胞活力检测试剂,包含一种具细胞膜渗透性、无毒性且弱蓝色荧光的指示剂刃天青(resazurin)。阿尔玛蓝是目前的细胞增殖和细胞毒性检测试剂之一,以其低毒性安全,操作灵活简单,灵敏度高,适用细胞范围广等优点被越来越多的科研工作者所认可。阿尔玛蓝包含一种具细胞膜渗透性、无毒性且弱蓝色荧光的指示剂,即刃天青(resazurin)。刃天青是一种氧化还原(REDOX)指示剂,根据细胞代谢还原情况发生颜色变化。氧化态的刃天青呈紫蓝色且基本无荧光,其还原态产物试卤灵(resorufin)转变为粉红色且发荧光,其激发光波长在530-560 nm之间,发射光波长为590 nm。
  • 检测原理 刃天青是一种氧化还原指示剂,根据细胞代谢还原情况发生颜色变化。氧化态的刃天青呈紫蓝色且基本无荧光,其还原态产物试卤灵(resorufin)转变为粉红色且高度荧光,产生的荧光强度与呼吸活细胞数量呈正比。阿尔玛蓝的颜色变化可通过普通分光光度计检测吸光度变化,检测波长为570nm,参考波长为600nm;阿尔玛蓝的荧光变化可通过荧光光度计检测,激发波长在530~560nm之间,发射波长为590nm。
  • 注意事项 1、还原态的Alamar Blue在水或水溶性缓冲液如PBS中很不稳定,但在培养基内非常稳定。为了确定特定实验还原态Alamar Blue的吸光度/荧光值,需准备100%还原态Alamar Blue试剂:将Alamar Blue与细胞培养基按照1:10的比例混合,高压灭菌15min即可。
    2、适宜的细胞密度能够增加检测灵敏度。对于96孔板,建议每孔接种100μl细胞,细胞浓度范围:贴壁细胞为100-10,000个/孔,悬浮细胞在2,000-50,000个/孔,以培养基为空白对照。对于384孔板,细胞浓度和接种量均减半。
    3、影响细胞对Alamar Blue反应的两大变量为孵育时间和铺板密度,建议实验前需先摸索优化这两个因素。细胞密度过高或孵育时间过长都会导致继发性还原反应,红色产物停止增加并开始衰减,导致吸光度/荧光水平明显下跌并伴随红色消失。
    4、微生物污染会还原Alamar Blue。因此对被污染细胞使用Alamar Blue检测会引起错误结果。
    5、Alamar Blue可以用分光光度计或荧光计检测,但荧光灵敏度高,实验误差小,推荐荧光检测。
    6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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