人皮肤黑色素瘤细胞

1）准备MEM-EBSS培养基(Minimum Essential Medium(MEM Eagles with Earle’sBalanced Salts)(MEM-EBSS))(MEM，GIBCO,41500034,添加EBSS)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）人皮肤黑色素瘤细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为95%。

3）人皮肤黑色素瘤细胞冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

复苏人皮肤黑色素瘤细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 人皮肤黑色素瘤细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。