考马斯亮蓝染色液

考马斯亮蓝染色液是指用于测定蛋白定性定量分析方法中的检测试剂。考马斯蓝染色法又称Bradford法，是Bradford于1976年建立起来的一种蛋白质浓度的测定方法。其主要利用Coomassie Brilliant Blue G-250这种酸性染料与蛋白质在酸性环境下产生吸附，导致染料的最大吸光波长从465 nm变为595 nm。通过制备不同浓度的牛血清白蛋白标准品液，与Bradford试剂混合后测定其595 nm吸光度值，绘制标准曲线。与标准品同量的样品蛋白溶液与Bradford试剂混合。5 min后在595 nm波长下测定各样品与标准品的吸光度。根据标准曲线，计算出各样品的蛋白浓度。

考马斯亮蓝是一种酸性染料，常用的考马斯亮蓝有G250（绿色）和R250（红色），250表示染料的纯度。在酸性条件下，其可以与蛋白质中的多个氨基酸(如赖氨酸、精氨酸等)结合形成复合物。两者都是通过疏水作用和静电引力与蛋白质结合，但侧重点略有不同：
G250：在游离态（红棕色）时，其疏水区域暴露。当遇到蛋白质的疏水口袋时，它嵌入其中，同时其带正电的基团与蛋白质带负电的区域（如天冬氨酸、谷氨酸残基在酸性条件下）发生静电吸引。结合后，其电子结构改变，吸收光谱发生红移，从红棕色变为蓝色。颜色变化明显是其定量应用的关键。
R250：在酸性甲醇溶液中呈蓝色。染色时主要依靠疏水作用嵌入蛋白质的疏水区域。