TRIZOL(总RNA提取试剂)

Trizol试剂中的异硫氰酸胍是一种强力的蛋白质变性剂，它能迅速破坏细胞结构，使细胞内的核酸和蛋白质释放出来。同时，异硫氰酸胍还能有效抑制细胞释放出的核酸酶活性，保护RNA不被降解。在细胞裂解后，加入氯仿进行离心。氯仿的密度大于水，且能与苯酚结合，从而抽提酸性的苯酚。苯酚的存在促使RNA进入水相，而大部分DNA和蛋白质则保留在中间相或下层有机相中。通过离心，可以实现RNA与其他细胞成分的分离。收集上层水相后，加入异丙醇以沉淀RNA。异丙醇的-OH基团为亲水基团，能与水结合，从而使RNA脱水并产生沉淀。使用乙醇洗涤RNA沉淀，以去除残留的异丙醇和其他有机溶剂，同时去除RNA表面吸附的少量杂质。洗涤后，RNA沉淀被干燥并用无RNase的水溶解，得到纯净的总RNA。

TRIZOL(总RNA提取试剂)主要由异硫氰酸胍、苯酚、8-羟基喹啉、β-巯基乙醇等成分组成。
①异硫氰酸胍属于解偶剂，是一种强力的蛋白质变性剂，能迅速溶解蛋白质，使蛋白质二级结构消失，细胞结构降解，从而使核蛋白与核酸解聚，将RNA释放到溶液中。同时，它还能有效抑制细胞释放出的核酸酶活性，保护RNA的完整性。
②苯酚的主要作用是使蛋白质变性并沉淀，同时溶解脂质；与后续加入的氯仿配合，形成密度梯度，实现RNA (上层水相) 与蛋白，杂质(下层有机相)的物理分离。
③8-羟基喹啉可以抑制RNase活性，与氯仿联合使用时可显著增强对内源性和外源性RNase的抑制作用。
④β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键，从而进一步抑制RNase活性。