猴子白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA KIT

双抗体夹心法 本试剂盒应采用双抗体夹心法测定血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中的含量。   猴 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。   1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。 4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。     可检测样本中猴的IL-8，且与其类似物无明显交叉反应。 白细胞介素8（IL-8）是一种由巨噬细胞和其他细胞类型如上皮细胞、气道平滑肌细胞和内皮细胞产生的趋化因子。内皮细胞将IL-8储存在它们的储存囊中，即Weibel-Palade体。白细胞介素8（IL-8）由CXCL8基因编码。IL-8最初以99个氨基酸的前体肽产生，然后经过裂解产生几种活性IL-8异构体。在培养中，72个氨基酸的肽是巨噬细胞分泌的主要形式.表面膜上有许多能够结合IL-8的受体；最常研究的类型是G蛋白偶联的蛇形受体CXCR1和CXCR2。这两种受体的表达和对IL-8的亲和力不同（CXCR1>CXCR2）。通过一连串的生化反应，IL-8被分泌出来，是先天免疫系统反应中免疫反应的一个重要媒介。IL-8，也被称为中性粒细胞趋化因子，有两个主要功能。它诱导目标细胞的趋化性，主要是中性粒细胞，也包括其他粒细胞，使它们向感染部位迁移。一旦它们到达，IL-8还能刺激吞噬作用。众所周知，IL-8也是一个强有力的血管生成的促进者。在目标细胞中，IL-8诱导迁移和吞噬所需的一系列生理反应，如细胞内Ca2+的增加、外渗（如组胺释放）和呼吸爆发。