U-2 OS 人骨肉瘤细胞

U-2 OS人骨肉瘤细胞是由Ponten·J和Saksela·E在1964年从一名15岁女孩的胫骨中等分化的肉瘤中分离建立的。U-2 OS细胞与WI-38细胞共培养或用抗猴空泡病毒SV40、呼吸道合胞病毒RSV或腺病毒的补体结合试验(CF法)未检测到病毒。U-2 OS细胞表达胰岛素样生长因子I、II(IGF-I、IGF-II)受体和骨肉瘤衍生生长因子(ODGF)。生长培养基 ：McCoy's 5A＋10%FBS＋1%P/S；培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%；温度：37℃。 U-2OS细胞是由J. Ponten and E. Saksela 于1964年从一名15岁白人女性骨肉瘤患者的胫骨中分化肉瘤中获得的具有上皮形态的细胞系。U-2OS细胞与WI-38细胞共培养或用抗猴空泡病毒SV40、呼吸道合胞病毒RSV或腺病毒的补体结合试验（CF法）未检测到病毒。U-2OS细胞表达胰岛素样生长因子Ⅰ、Ⅱ（IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ）受体和骨肉瘤衍生生长因子（ODGF）。U-2OS细胞可以用于3D细胞培养，也是一种合适的转染宿主。

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S；

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

1） 来源：骨肉瘤
2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长 上皮细胞样(多边形或梭形)

U-2OS]人骨肉瘤细胞可以用于人骨肉瘤细胞U2OS靶向肽的筛选、鉴定及初步应用研究。

1.尽量吸干净T25瓶原培养基；2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；4.将培养瓶放入37度培养箱消化；5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） 骨肉瘤；女性；15岁 贴壁细胞