甲状旁腺激素

人甲状旁腺激素(PTH)由84个氨基酸所组成的单链多肽，不含胱氨酸，分子量约9.500。甲状旁腺激素的主要作用是调节体内钙和磷的代谢。它一方面加强破骨细胞溶解骨质的活动，使骨组织中的磷酸钙分解释放入血，保持血钙的正常含量(9～11毫克%)，另一方面抑制肾小管对磷的重吸收，使磷的排泄增多，而使血磷浓度降低;当血磷降低时，骨骼中的磷酸钙又释放入血以补充血磷，使血钙增高。

甲状旁腺激素的生理作用如下：

①增强破骨细胞活动，促进骨质吸收，动员骨钙进入血液，使血钙增高；

②抑制近球小管对磷的重吸收，使尿中磷酸盐增多，并促进远球小管和集合管对钙的重吸收，使尿钙降低；

③可激活肾内羟化酶，促进25-羟维生素D3转变为具有活性的1，25-二羟维生素D3，从而增进肠道对钙的吸收。血钙浓度又控制PTH的分泌，血钙降低时促进其分泌，增高时抑制其分泌，高血磷则通过血钙浓度降低而引起PTH分泌。

甲状旁腺激素（PTH）主要用于诊断原发性甲状旁腺功能亢进症，此外在高血压、糖尿病、肾性骨病、妊高征等患者中也表现为增高。 本试剂盒应采用双抗体夹心法测定血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中的含量。   1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。   1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。 4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。