ECL发光液

ECL发光液（enhanced chemiluminescence）是一种基于鲁米诺（Luminol）的新一代增强型化学发光底物试剂，在Western blot免疫印迹实验中有着广泛的应用，是目前免疫印迹实验中最常用的高灵敏的显色试剂。它由A液和B液组成。一般使用的发光液A和B分别是鲁米诺和过氧化氢。鲁米诺（Luminol），又名发光氨，是一种化学荧光分子，化学名称为3-氨基苯二甲酰肼，化学式为C8H7N3O2。鲁米诺是一种黄色结晶粉末，易溶于碱液，几乎不溶于水，对眼睛、皮肤、呼吸道有一定刺激作用。在辣根过氧化物酶（HRP）的催化作用下，鲁米诺与过氧化氢反应生成一种过氧化物，过氧化物不稳定随即分解，形成一种能发光的电子激发中间体，当后者由激发态返回至基态，就会产生荧光。

ECL发光液的核心原理为氧化反应发光：鲁米诺作为发光底物的主要成分，在碱性条件下，通过辣根过氧化酶（HRP）催化，被H2O2氧化生成3-氨基邻苯二酸的激发态中间体，当其回到基态时发出光子，最大发射波长为425 nm，光子信号可通过X射线胶片或CCD成像仪被捕获。这个过程被发光增强剂加强。其中，增强剂在体系中扮演着核心角色，决定着ECL 化学发光的发展。