磷酸化蛋白质组定量

蛋白质磷酸化是一种非常重要且广泛存在于原核生物和真核生物中的翻译后修饰调控方式, 参与细胞的增殖、发育、分化、凋亡,细胞骨架调控、神经活动、肌肉收缩、新陈代谢及肿瘤发生等。由于磷酸化修饰的蛋白质在生物样本中含量低、动态范围广，利用定量蛋白组学分析手段对富集得到的磷酸化肽段样品进行定量分析前，需要对修饰进行富集从而提高修饰蛋白丰度。通过蛋白定量技术和修饰富集技术相结合，可对样本中翻译后修饰进行相对定量，筛选差异修饰位点和差异修饰蛋白。 定量蛋白质组分析的方法和技术原则上都适用于磷酸化蛋白质定量分析，包括Label free，TMT法，iTRAQ等定量方法。但由于磷酸化蛋白质自身的一些特点，使得磷酸化蛋白质组定量分析遇到新的困难 。首先，磷酸化蛋白质含量少，化学计量值低，磷酸化的肽段很容易淹没在大量非磷酸化的肽段中，其次，磷酰键较肽键容易断裂，使磷酸化蛋白比非磷酸化蛋白鉴定困难得多。所以，进行磷酸化蛋白质组相对定量分析，首先要对磷酸化肽段进行高通量的选择分离和富集，其次要选择使用适合磷酸化肽段的定量方法。