人骨膜蛋白(POSTN)ELISA检测试剂盒

双抗体夹心法 本试剂盒用于测定人血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中骨膜蛋白(POSTN) 的含量。 人 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人骨膜蛋白(POSTN) 水平。用纯化的骨膜蛋白(POSTN) 捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入骨膜蛋白(POSTN) ，再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的骨膜蛋白(POSTN) 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中骨膜蛋白(POSTN) 含量。   1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。   1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。 4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。 8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。     可检测样本中人的POSTN，且与其类似物无明显交叉反应。 Periostin（POSTN、PN或成骨细胞特异性因子OSF-2）是一种蛋白质，由POSTN基因编码。Periostin作为α-V/β-3和α-V/β-5整合素的配体，支持上皮细胞的粘附和迁移。骨胶原蛋白是一种釉质结构的维生素K依赖性因子，它是一种分泌型细胞外基质蛋白，最初在间质系细胞（成骨细胞、成骨细胞衍生的细胞、牙周韧带和骨膜）中被发现。它与癌症中的上皮-间质转化以及发育中的心脏中的间质分化有关。该蛋白与昆虫中的分泌型细胞粘附分子FasciclinI有同源性。在许多癌症中，periostin与癌细胞上的整合素结合，激活Akt/PKB和FAK介导的信号传导途径。这导致了细胞存活率、侵袭、血管生成、转移和上皮-间质转化的增加。在人类和小鼠中，periostin在其C端区域进行替代剪接，产生特定的异构体，可在广泛的癌症中观察到，如胰腺癌、结肠癌和乳腺癌。虽然骨胶原蛋白在组织发育和疾病中发挥着广泛的作用，但它在组织重塑中作为对损伤的反应的功能是这些不同机制中共同的基本作用。在细胞命运的变化过程中，无论是与生理学的改变还是与病理变化有关，围岩蛋白都会暂时性地上调。它影响细胞外基质的重组、组织重塑和上皮-间质转化，所有这些都可能与组织愈合、发育和疾病有关。因此，它的功能是作为一个调解人，平衡对组织损伤的适当和不适当的反应。