人胰腺癌相关成纤维细胞永生化

人胰腺癌相关成纤维细胞永生化细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。它来源于人手术胰腺癌组织；不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌；细胞生长方式为长梭形，贴壁培养。

1. 细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满培养基运输，获得细胞后用酒精棉球擦拭瓶口消毒，然后在超净台中操作。
2. 如细胞生长至70%-80%，将瓶中的培养基移入无菌瓶中留作培养使用，保留5-8mL培养基在37℃、5%的CO2的温箱中继续培养。细胞培养至90%-100%后，按要求消化传代。
3. 弃去培养基，用无菌PBS或者其他缓冲液清洗细胞2次，加入适量胰蛋白酶消化（EDTA胰酶），待细胞完全脱壁后加培养基吹打混匀，分瓶培养。