大鼠血管平滑肌细胞

1、颈椎脱臼处死大鼠，75%酒精浸泡3～5min，无菌条件下打开胸腔，将大鼠左肺向右侧翻转，可见贴于脊柱右侧胸主动脉走行。上端沿主动脉弓，下端至膈的主动脉裂孔处，完整剪取胸主动脉，置于预先装有PBS的无菌培养皿中;

2、用镊子轻轻剥离血管外结缔姐织，移至另一装有PBS的无菌培养皿;

3、用眼科剪沿纵轴剪开血管条，无菌镊轻轻刮除内膜，移至另一无菌培养皿;

4、用镊子钝性加压刮中膜2次,待出现裂口后夹住中膜将其取下;

5、将取下的中膜加入含20%FBS的DMEM培养液，用眼科剪剪碎血管条，使组织块大小约1mm×1mm×lmm;

6、用无菌滴管将组织块吸入细胞培养瓶，均匀铺于瓶壁，间距约0.2～0.5cm;

7、将培养瓶直立放置于37℃/5%CO2细胞培养箱;

8、1h后轻轻放平，37℃/5%CO2细胞培养箱中绝对静置3d;

9、此后每3d换液1次;

10、培养出来的VSMC及时传代及冻存于液氮，3～8代用于后续实验。