ACHN人肾细胞腺癌细胞

ACHN人肾细胞腺癌细胞是剪切过的人腺病毒5（Ad5）转染的人胚肾细胞形成的永生化细胞。此细胞包含并表达转染的Ad5基因。早期报道中指出该细胞基因组中含有腺病毒5（Ad5）基因组的左侧端和右侧端的DNA，但是现在明确了只存在其左侧端的DNA。经过对Ad5的插入点的克隆测序发现，Ad5的1～4344位线性核苷酸整合入细胞染色体19q13.2。该细胞为人类腺病毒载体扩增的宿主。 ACHN细胞于1979年11月从一名患有广泛转移性肾腺癌的22岁白人男性的恶性胸腔积液中建立（尸检证实），获得的细胞直接接种到含有10S的Eagle's MEM培养瓶中，然后在培养瓶中保持并传代150天, 后将细胞皮下接种到裸鼠体内。4周后，发现可触及的局部浸润性肿瘤。原始细胞（ACHN）和从裸鼠肿瘤中重新获得的细胞都可以被人干扰素抑制生长。ACHN细胞能用于人干扰素、干扰素诱导因子的抗肿瘤活性研究。

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

上皮细胞样(偏梭形上皮样) 1.尽量吸干净T25瓶原培养基；2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；4.将培养瓶放入37度培养箱消化；5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） 肾癌；胸腔积液转移；男性；22岁 贴壁细胞