BCA蛋白定量分析试剂盒

BCA蛋白定量分析试剂盒是进行蛋白质浓度测定的最常见的方法之一。BCA蛋白定量的主要原理是：蛋白质在碱性条件下，可以将二价Cu2+离子还原成一价Cu+离子。产生的一价Cu+离子可以与BCA（Bicinchoninic acid）试剂结合，最终生成紫色的复合物。该复合物在562 nm处有很强的吸收峰。复合物的多少与蛋白质的浓度呈接近的线性关系。

BCA蛋白定量分析试剂盒

（1）BCA工作液总体积的计算：

BCA工作液总体积=（标准品数量+待测样品数量+1）×重复数×200μL。

举例：如果标准品数量为8，待测样品数量1，重复数为3，则BCA工作液总体积=（8+1+1）×3×200μL=6000μL

（2）BCA工作液的配制：按50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B（A:B=50:1），充分混匀。

举例：将5000μL的BCA试剂A与100μL的BCA试剂B混合，得到5100μL的BCA工作液。

2.BSA标准品的配制

将BSA标准品做系列稀释，分别得到如下9个不同浓度的标准品：2000μg/mL，1500μg/mL，1000μg/mL，500μg/mL，250μg/mL，125μg/mL，62.5μg/mL，31.25μg/mL，0μg/mL。

注：严格的蛋白定量，BSA标准品的稀释溶液应该与待测蛋白样品的溶液相同。但是一般情况下，BSA标准品可以直接用0.9%的NaCl、PBS或者去离子水进行稀释。

3.取BSA标准品和待测样品各25μL到96孔板孔内，

注：正常情况下，样品与BCA工作液的体积之比应为1:8。如果样品体积有限，也可使用10μL BSA标准品和待测样品进行检测（即样品与BCA工作液的体积之比为1:20），这时BCA定量试剂盒的检测范围较小为125-2000μg/mL。

4.往每孔中加入200μL的BCA工作液，盖上96孔板盖子。

5.将96孔板放37℃，30分钟。

6.用酶标仪测562 nm处的光吸收值。