重组人表皮生长因子

表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,简称EGF )是广泛存在于哺乳动物体内的一类多肽物质。

EGF是一种有效的生长因子，可刺激各种表皮和上皮细胞的增殖。另外，EGF可抑制胃分泌，并参与伤口愈合。EGF通过称为c-erbB的受体发出信号，该受体是I类酪氨酸激酶受体。该受体还与TGF-α和VGF（痘苗病毒生长因子）结合。重组鼠EGF是6.0kDa球状蛋白，含有53个氨基酸残基，包括3个分子内二硫键。 通过SDS-PAGE凝胶和HPLC分析其纯度大于98％。 通常，冻干蛋白在-20至-80℃下保存可稳定保存长达12个月。复溶后的蛋白溶液可在4-8℃下保存2-7天。复溶后的样品在低于-20℃下可稳定保存3个月。 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物表皮生长因子(EGF)水平。用纯化的表皮生长因子(EGF)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入表皮生长因子(EGF)，再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的表皮生长因子(EGF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中表皮生长因子(EGF)含量。   1. 组织标本：对于样本要求保持鲜重，称取样本中的重量不小于50mg，一般以1g为基准,但不严格要求固定样本每个重量必须达到相同的水平。匀浆的比例选取10%，相当于1g组织加9ml的匀浆液来进行匀浆。匀浆液选取PBS（PH=7.2-7.4，浓度为0.01mol/L）。匀浆过程选用组织匀浆器，冰浴上匀浆。(或者进行液氮碾磨)，离心取上清，离心转速选用5000转每分，时间是15分钟。取上清液待检。 2. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 3. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。   1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。 4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.  8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值），测定应在加终止液后15分钟以内进行。