人基质金属蛋白酶7(MMP-7)ELISA KIT

双抗体夹心法

人基质金属蛋白酶7(MMP-7)ELISA KIT采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用人基质金属蛋白酶7(MMP-7)单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的ANGPTL3与单抗结合，加入生物素化的人基质金属蛋白酶7(MMP-7)，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，ANGPTL3浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中ANGPTL3浓度。

人

人基质金属蛋白酶7(MMP-7)ELISA KIT用于基质金属蛋白酶7和13在人椎间盘不同结构中的表达情况与椎间盘退变程度关系的研究。

本试剂盒用于测定人血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中基质金属蛋白酶7(MMP-7)的含量。 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人基质金属蛋白酶7(MMP-7)水平。用纯化的基质金属蛋白酶7(MMP-7)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入基质金属蛋白酶7(MMP-7)，再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的基质金属蛋白酶7(MMP-7)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中基质金属蛋白酶7(MMP-7)含量。   1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。   1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。 4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。 8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。     可检测样本中人的MMP-7，且与其类似物无明显交叉反应。 基质金属蛋白酶-7（MMP-7）是一种酶，由MMP7基因编码。也被称为matrin、基质金属蛋白酶泵1、PUMP-1蛋白酶、PUMP、金属蛋白酶泵-1、推定金属蛋白酶。人类MMP-7的分子量约为30kDa。人类MMP7基因的启动子区域含有两个或多个与NR-IL6结合序列同源的位点，表明MMP7可以与IL-1和IL-6结合。此外，MMP7mRNA的水平在肿瘤坏死因子α（TNF-α）和IL-1β处理后在人系膜细胞中升高。它通常在上皮细胞中表达，包括皮肤外分泌腺的导管上皮、唾液腺、胰腺、肠道和生殖器官的腺上皮、肝脏和乳房。此外，MMP7在人类结肠直肠癌中发育不良的腺体的管腔表面高度表达。