LAMP试剂盒 用途与合成方法
通用型LAMP试剂盒(Universal LAMP Amplification Ki)提供了更简单、更快速和更高质量的方法,包括质粒提取、胶回收、PCR产物纯化、基因组提取、RNA分离纯化、PCR/RT-PCR、荧光定量、克隆载体和感受态细胞制备等数百种实验常用试剂盒。 本试剂盒可以用于LAMP等温扩增,LAMP即Loop-Mediated IsothermalAmplification(环介导等温扩增),是2000年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA 聚合酶,在等温条件下(63℃左右)30-60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术,同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程,不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。
1.LAMP OTG Reagent为干粉形式，包含Bst 4.0 DNA聚合酶、dNTP等，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用前每瓶用0.75mL的LAMP Buffer溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。
2.OTG染料已经预先加入在EP管盖上，为干粉形式，其牢固的结合在管盖上，仅有反应完毕后，将EP管倒置后才能将其溶解，溶解后其将立即终止LAMP反应，并与LAMP反应产物形成鲜亮的绿色可见光。在配制反应液和反应过程中务必不能将EP管盖上的染料混入反应液中，否则会导致LAMP反应终止。
3.按下表在0.2mL EP反应管中加入各成分配制反应体系
注：
① 全部试剂加入完毕后，轻弹EP管底部后，再盖上含OTG染料的EP管盖（盖上管盖后务必不能再剧烈混合与倒置，以防止将管盖上的OTG染料溶解，OTG染料一旦混入反应液中将会终止LAMP反应）。
② 首次实验时LAMP Primer Mix分别采用1、1.5、2μL，以阴性不变色，阳性样品正常变色为标准，作为后续测试用量。
4.反应体系配好后，置于60～65℃（首次实验采用60℃）进行反应20～45min（扩增良好的引物组合，通常25min即可变色，一般不超过45min，首次实验设置20、25、30、45min）。
5.观察结果：观察结果时，尽可能不要与配制反应空间共用，以防止污染操作台。将反应EP管倒置，并手腕轻甩，反应液浸泡EP管盖上的OTG染料，静置30s。再将EP反应管正置，并轻甩反应液到EP管底部，此时扩增样品将变为鲜艳肉眼可见绿色，而阴性未发生扩增的管将为深橙色。（在LAMP反应结束后禁止将反应管盖打开，否则可能会导致气溶胶污染）。一旦发生气溶胶污染，请使用百奥莱博公司的DNA污染去除剂（货号：MT3001）进行环境清理。
