RKO-AS45-1人结肠癌转基因细胞

人的cDNA中编码GADD45的开放阅读框克隆到表达载体pCMV.3中，转染结肠癌细胞RKO，建立了RKO-AS45-1人结肠癌转基因细胞株。RKO-AS45-1人结肠癌转基因细胞含有稳定整合巨细胞病毒（CMV）启动子的表达载体。RKO-AS45-1细胞系和它的母系RKO一起可用于Gadd45对DNA修复、凋亡和药物敏感性研究。 RKO-AS45-1细胞是通过将人的cDNA中编码GADD45开放阅读框的基因克隆到表达载体pCMV.3中，然后使用该载体转染结肠癌细胞RKO而获得的。RKO-AS45-1细胞含有稳定整合的巨细胞病毒（CMV）启动子驱动的表达载体，细胞过度表达GADD45基因mRNA和蛋白质，GADD45基因受p53调控，GADD45蛋白与参与细胞周期调控和DNA修复的蛋白相互作用。RKO-AS45-1细胞修复UV诱导的DNA损伤的能力降低。RKO-AS45-1细胞系可与其亲本细胞系RKO（ATCC CRL-2577）一起用于研究GADD45对DNA修复、细胞凋亡和药物敏感性的影响。RKO-AS45-1细胞可以用于3D细胞培养和癌症研究。 RKO-AS45-1人结肠癌转基因细胞组织来源于结肠癌组织，整合起动GADD45a表达载体的CMV启动子，属于上皮细胞样的贴壁生长细胞。 上皮细胞样(圆形、多角形或梭形)

收到细胞后，在倒置显微镜下观察RKO-AS45-1人结肠癌转基因细胞的生长情况：

如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

如果细胞已长满（达80-90%），即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用不含钙、镁离子的PBS洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒转放于37℃培养箱1-3分钟预热，然后将培养瓶翻过来让胰酶与细胞面接触大约10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的第一次传代一般是一传三。

 

1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） 结肠癌；转基因 贴壁细胞