SVEC4-10(小鼠淋巴结内皮细胞)

SVEC4-10(小鼠淋巴结内皮细胞)是来源于成年小鼠腋窝淋巴结的上皮细胞样贴壁细胞系，不含真菌、细菌、HIV、支原体、衣原体等污染，生长培养基：DMEM＋10%FBS＋1%P/S。

SVEC4-10细胞是通过SV40（菌株4A）转化来自成年雄性C3H/HeJ小鼠的腋窝淋巴结血管内皮细胞获得的。SVEC4-10细胞在没有特殊添加剂的情况下可以无限期生长，并且分化良好，可以像正常内皮细胞一样对一些白细胞介素和细胞外基质信号作出反应而出现管状分化，在干扰素γ（IFN-γ）在诱导下可以与正常内皮细胞一样表达MHC II类抗原，肿瘤坏死因子α（TNFα）可以诱导SVEC4-10细胞发生可逆的向纺锤形形态的转变。当生长在合成基底膜上时，SVEC4-10细胞形成分支管状结构。SVEC4-10细胞在体外可以特异性结合小鼠淋巴细胞。SVEC4-10细胞表达细胞表面主要组织相容性复合体I类抗原H-2k，并且易被抗SV40 H-2k CTL克隆裂解；表达血管细胞粘附分子（VCAM），SV40T抗原染色阳性。SVEC4-10细胞可以用于3D细胞培养。

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

1） 来源：小鼠 辅助淋巴结; 血管上皮
2） 形态：上皮细胞样, SV40转染 贴壁生长 内皮细胞样(梭形或多角形) 1.尽量吸干净T25瓶原培养基；2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；4.将培养瓶放入37度培养箱消化；5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） 腋窝淋巴结；内皮细胞；SV40转化；雄性；C3H/HeJ；成年 贴壁细胞