胰蛋白酶抗原修复液

胰蛋白酶抗原修复液是多种抗原修复方法之一。抗原修复是公认的免疫组化比较关键的一个步骤，在免疫组化过程中会对样品材料进行固定，一般常用的就是福尔马林或者多聚甲醛溶液。科学研究已经证明甲醛的醛基与蛋白质发生交联反应，不同程度的遮蔽了抗原表面的抗原决定簇，影响其与抗体结合。抗原修复的方法主要分为三大类：压力热修复法，微波热修复和酶消化法。酶消化法适用于某些细胞内抗原（如Fas、Bax、FⅧ等）和细胞间质抗原（如Laminin、CoIV等）切片，常用的消化酶有三个包括胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K。

胰蛋白酶0.05 g，无水氯化钙0.05 g，溶解后用NaOH溶液调整pH到7.6，定容到100 ml。须临用前配制。消化条件为37 ℃ 10 ~ 30 min；深固定的组织如果效果不够且显微结构未见明显损伤，可适当加长时间。 胰蛋白酶和蛋白酶K一般用于细胞内抗原，如Keratin，CEA，GFAP等。一般说来，胰蛋白酶消化能力较胃蛋白酶弱，主要用于细胞内抗原的消化，胃蛋白酶主要用于细胞间抗原的消化，如fibronectin，Laminin，各型胶原等。消化时间和组织固定的长短呈正比。在用酶消化，热修复后均不能获得结果的前提下使用抗原修复与酶消化结合的方法，有时会取得较为满意的结果。一般蛋白酶K和微波相结合，但应注意，可能检测的抗原无论何种性质均会在核内出现假阳性反应。以高压加热方法、微波加热方法较为稳定，高压加热方法效果优于微波加热方法和单纯加热方法。溶液的浓度对修复效果无任何影响，而PH值则影响较大。缓冲液以柠檬酸缓冲液和Tris-HCL较常用。