人参皂苷RA2的制备

背景及概述^[1][2]

到目前为止人们从人参(或红参)中分得多种人参皂苷，包括人参皂苷R0、人参皂苷Ra1、人参皂苷RA2、人参皂苷Ra3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd等二醇组人参皂苷和人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg2等三醇组人参皂苷。因为二醇组人参皂苷和三醇组人参皂苷具有不同的生物活性，比如说二醇组人参皂苷具有中枢抑制作用、抗溶血作用；三醇组人参皂苷则具有中枢兴奋作用及溶血作用。

因此，把人参(或红参)中的人参皂苷分成二醇组人参皂苷和三醇组人参皂苷的话，就有可能获得具有不同生物活性的有效部位，也便于从中分得人参皂苷单体。分离二醇组人参皂苷和三醇人参皂苷的方法除了有机溶剂萃取或柱层析分离等传统方法外中国专利《人参分组皂甙的制备方法、其药物组合物及应用》(公开号：CN1190098)和《一种二醇组人参皂苷和三醇人参皂苷的分离方法》(公开号：CN1594352)公开了二醇组人参皂苷及三醇组人参皂苷的分离方法。

应用^[3]

人参皂苷RA2是五加科草本药用植物人参、西洋参等的主要活性成分，具有广泛的药理作用和医疗用途。人参皂苷具有提高人体免疫力、促进物质代谢、抗肿瘤、抗疲劳、抗光老化、抗氧化、清除自由基及免疫刺激作用。

近年来的多项研究表明，人参皂苷RA2在抗肿瘤、增强免疫力、抗疲劳以及清除自由基等生物活性方面较常见人参皂苷具有更高的药理活性。如人参皂苷CK是公认的一种具有良好的生物学活性的潜在的多功能药物，它具有抗过敏、降血糖、抗肿瘤、抗炎，抗衰老及保肝等效果。

制备^[2]

方法一：

1、总提物的制备

将红参粉碎，以料/液比1:10(g/mL)加入75％乙醇(乙醇水溶液，体积百分浓度，下同)，热回流提取3次，每次提取2h，过滤后合并滤液，滤液浓缩干燥得到红参总提物。

2、大孔吸附树脂富集总皂苷

以料/液比1:20(g/mL)向红参总提物中加入5％乙醇，搅拌溶解，过滤，上样于D101大孔吸附树脂柱，树脂柱径高比为1:8，上样液体积为1BV，上样速度为2BV/h，上样结束后静置吸附0.5h，先用25％乙醇洗脱10BV，再用75％乙醇洗脱15BV，收集75％乙醇洗脱液，浓缩干燥得红参总皂苷。

3、微孔吸附树脂富集目标人参皂苷

以料/液比1:20(g/mL)向红参总皂苷中加入5％甲醇，搅拌溶解，过滤，上样于MCIGELCHP20微孔吸附树脂柱，树脂柱径高比为1:10，上样液体积为1BV，上样速度为2BV/h，上样结束后静置吸附0.5h，先用30％甲醇(甲醇水溶液，体积百分浓度，下同)洗脱8BV，再依次用含有万分之五甲酸(体积百分浓度)的60％、70％、80％甲醇溶液洗脱4BV、3BV、3BV，分别收集第4BV的60％甲醇洗脱液、第3BV的70％甲醇洗脱液、第3BV的80％甲醇洗脱液，分别浓缩干燥得目标人参皂苷A段、目标人参皂苷B段、目标人参皂苷C段。

4、高速逆流色谱分离纯化

4.1目标人参皂苷A段

以正己烷：正丁醇：乙酸乙酯：乙醇：水(含万分之五冰乙酸，体积百分浓度)＝1:2:5:1:6为溶剂体系，静置过夜，两相分离后超声脱气，上相作为固定相，下相作为流动相；固定相以20mL/min的流速泵满主机管路后，仪器以900rpm正向旋转，柱温箱25℃，波长225nm；下相以2mL/min泵入主机管路，平衡后取10mL用等体积上、下相溶解的浓度为20mg/mL的目标人参皂苷A段溶液进样，进样后进行图谱采集，根据色谱图(如图1)收集人参皂苷RA2、人参皂苷Ra3色谱峰对应的流出液，分别浓缩干燥得人参皂苷RA2、人参皂苷Ra3。

人参皂苷RA2纯度为98.1％，人参皂苷Ra3纯度为97.3％。

方法二：

人参5公斤，加水煎煮提取三次，每次加水量分别是人参重量的12、10、8倍，煎煮时间分别是2、1.5、1小时，合并煎煮液，过D4020大孔吸附树脂吸附，用水冲净，85％乙醇洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1(硅胶薄层层析检测，正丁醇∶乙酸乙酯∶水＝4∶1∶5，上层，10％硫酸喷雾，105℃加热显色，以下相同)为止，洗脱液回收乙醇，得人参总皂苷351克。

取人参总皂苷10克，用水溶解后上氧化铝柱，先用水洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Re、人参皂苷Rg1为止，洗脱液重新过AB-8大孔吸附树脂吸附，乙醇洗脱，减压回收溶剂，得三醇组人参皂苷3.1克，经TLC检查，其中主要成分是人参皂苷Re、人参皂苷Rg1。然后用50％的四氢呋喃地水溶液洗脱至洗脱液中检测不到人参皂苷Rb1为止。洗脱液减压回收溶剂，得二醇组人参皂苷5.2克。经TLC检查，其中主要成分是人参皂苷Ra1、人参皂苷RA2、人参皂苷Ra3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd等二醇组人参皂苷。

主要参考资料

[1] 王洪平, 杨鑫宝, 杨秀伟, 刘建勋, 王英平, & 张连学. (2013). 吉林人参根和根茎的化学成分研究. 中国中药杂志, 38(17), 2807-2817.

[2] 周琪乐, 徐嵬, & 杨秀伟. (2016). 中国红参化学成分研究. 中国中药杂志, 41(2), 233-249.

[3] 林卫东, 陈超, 梁生旺, 田元新, 王淑美, & LINWei-dong等. (2016). 人参皂苷改善胰岛素抵抗的网络药理学. 中成药, 38(7), 1455-1461.