缝籽木蓁甲醚的应用

概述^[1][2]

钩藤为茜草科(Rubiaceae)钩藤属(Uncaria)植物，主要有效成分为生物碱，如钩藤碱(rhynchophylline)、异钩藤碱(isorhynchophylline)等。钩藤为中医常用药，具有清热平肝，息风定惊，降血压之功效(杨成金.云南植物研究，1995，17：209-214.)。但到目前为止，尚未见关于钩藤生物碱单体成分在制备乙酰胆碱酯酶抑制剂中的用途。缝籽木蓁甲醚为钩藤化学成分之一。

结构

制备方法^[1]

钩藤生物碱单体成分缝籽木蓁甲醚的制备：称取钩藤粉末10kg，加入95％乙醇60L热回流提取2h，抽滤干；再加入95％乙醇40L热回流提取2h，再抽滤。两次的提取液合并浓缩至干，加7L蒸馏水溶解，用4M的浓盐酸调pH值到2，静置15h后抽滤。滤液用2M氢氧化钠水溶液调pH值到10。每次加入7L氯仿萃取，共萃取3次，萃取液合并浓缩至干，得到钩藤总生物碱14.8g。然后将制得的钩藤总生物碱通过MCI-gel柱层析甲醇-水梯度洗脱(50％，60％，70％，80％，90％，100％)，收集80％和90％甲醇-水洗脱部分，浓缩至干，加丙酮溶解后，重结晶得到钩藤生物碱单体成分缝籽木蓁甲醚1.5g。

应用^[1]

改良的Ellman法测定钩藤生物碱单体成分缝籽木蓁甲醚的抗乙酰胆碱酯酶活性。利用改良的Ellman方法测定生物缝籽木蓁甲醚乙酰胆碱酯酶的抑制率，毒扁豆碱作为阳性对照药。具体实验过程如下：运用96孔酶标板来测定样品对酶的抑制活性，样品组中每孔加入140μL0.1M的磷酸缓冲液(pH＝8.0)，然后加入20μL的样品，空白孔中加入160μL磷酸缓冲液不加任何样品，阳性对照控制组中加入20μL0.1mg/mL的毒扁豆碱和140μL的磷酸缓冲液，样品本底孔中20μL的样品和155μL的磷酸缓冲液，除了样品本底以外的其它孔中均加15μL的乙酰胆碱酯酶，混匀在4℃下培养2min，然后每孔加10μL0.01mM的DTNB(5，5-二硫代双(2-硝基苯甲酸))和10μL0.075mM的ATCI(碘化硫代乙酰胆碱)，混匀在37℃下培养20min，立即在405nm下测定各孔OD值。每组实验重复三次。并以下面公式计算样品对乙酰胆碱酯酶的抑制率。根据量效关系和直线回归法可以计算出样品对乙酰胆碱酯酶的半数抑制浓度值(IC50)。结果表明钩藤生物碱单体成分缝籽木蓁甲醚对乙酰胆碱酯酶具有明显的抑制活性。其半数抑制浓度值(IC50)为10μM，

主要参考资料

[1]CN201010128383.2钩藤生物碱单体及制备方法和用途