磷酸转乙酰酶的制备方法

背景及概述^[1]

磷酸转乙酰基酶又称为磷酸转乙酰化酶，用于辅酶A效价的测定。辅酶A（CoA）是由泛酸巯基乙胺、腺苷和磷酸组成的核酸类化合物。由于易被氧化，通常是氧化型和还原型的混合物。CoA是生物体内乙酰化酶的辅酶，在物质代谢过程中起着传递乙酰基的作用，参与脂质类、糖类和蛋白质类的代谢，临床上主要用于白细胞减少症、原发性血小板减少性紫癜、高脂血症等。CoA现主要由微生物发酵酶法合成，其效价测定方法主要由磺胺乙酰化酶和磷酸转乙酰化酶法（PTA）。测定方法不同，效价表示方法也不同。现国际上通用的方法为PTA法，国家标准也采用此法。此法测定的效价是以还原型CoA单位表示的。其原理为乙酰磷酸盐与还原型CoA之间在PTA催化下，乙酰基可逆地转移，形成乙酰CoA和磷酸。

制备^[1-2]

磷酸转乙酰基酶应用举例如下：

1）磷酸转酮酶和磷酸转乙酰酶生产乙酰-辅酶A衍生化合物。这些组合物和方法基于以下惊人发现：基于磷酸转酮酶途径的乙酸根离子累积起因于为PK催化产物的乙酰磷酸的酶催化水解。乙酰磷酸水解是不需要的副反应，其通过消耗碳，可对来自乙酰辅酶A的任何类型产物的生产产生负面影响，所述衍生自乙酰辅酶A的任何类型产物包括类异戊二烯化合物，聚酮化合物和脂肪酸。在宿主细胞中，通过功能性地扰乱天然酶催化乙酰磷酸水解，而减少乙酸根离子的积累和增加朝向生产乙酰辅酶A的通过PK/PTA途径的碳流量增加。

2)利用乙酸和丙酸生产PHA的基因工程菌及其构建方法和应用。本发明所提供的制备用于生产PHA的工程菌的方法，包括如下步骤：提高受体菌中乙酸激酶、磷酸转乙酰酶、聚羟基脂肪酸酯合成酶、β?酮硫解酶、乙酰乙酰辅酶A还原酶、琥珀酸半缩醛脱氢酶、4?羟基丁酸脱氢酶、4?羟基丁酰辅酶A：辅酶A转移酶、丙酰辅酶A转移酶的表达和/或活性，且降低所述受体菌中非辅酶A循环的琥珀酸半缩醛脱氢酶的表达和/或活性，从而获得所述用于生产聚羟基脂肪酸酯的工程菌；所述受体菌为能够以乙酸作为碳源生长的菌。本发明制备的工程菌以乙酸为碳源生产PHA，且PHA产量达到较高的水平，具有较好的工业化应用前景。

主要参考资料

[1] CN201480025977.7磷酸转酮酶和磷酸转乙酰酶生产乙酰-辅酶A衍生化合物的用途

[2] CN201810148891.3利用乙酸和丙酸生产聚羟基脂肪酸酯的基因工程菌及其构建方法和应用