莲花掌苷的主要应用

背景及概述^[1]

莲花掌苷Lindleyin为莲花掌Aeoniumtabuliformef.cristata中的主要成分之一。药理作用主要表现为对心血管系统的作用、降血糖和降血脂作用、抗病原微生物作用、解热作用等。未见有文献报道其有关于神经保护方面的作用。

应用

1. 莲花掌苷体外神经细胞的修复活性研究。

采用MTT法测定莲花掌苷对由过氧化氢造成SH-SY5Y损伤的修复活性。

(1)仪器与试剂：DMEM培养基购自Hyclone公司，胎牛血清为Hyclone产品；CKX31型倒置显微镜(菲律宾奥林巴斯公司)；恒温CO2培养箱(美国Thermo公司)；5810R型台式高速低温离心机(德国Eppendorf公司)；全自动酶标仪(美国Biotek集团)；过氧化氢(国药集团化学试剂有限公司)

(2)细胞培养：将复苏后的细胞转移至培养瓶中，37℃培养箱中培养(5％CO2，相对湿度90％)，隔天更换培养液。待细胞长满瓶壁的80-90％左右时，进行传代或下步试验，控制细胞密度在1×105cells/mL左右。

(3)MTT法测定莲花掌苷物活性：取指数生长期的SH-SY5Y细胞，接种于96孔培养板中，细胞数密度为1×105个/mL，每孔加入100μL，置37℃，5％CO2孵箱中培养12h，细胞贴壁后每孔加入100ul400umol/L过氧化氢损伤6h，损伤结束后弃去培养液，分别加入不同浓度(5μM，10μM，20μM的含药物的培养液200ul，每个浓度设3个复孔，置37℃、5％CO2孵箱中培养24h。24h后每孔加入终浓度为0.5mg/mL的MTT，继续在孵箱中孵育4h。弃去上清，每孔加入150μLDMSO，在酶标仪上震荡5min后，在490nm处测定吸光值(OD值)。按照下式计算活细胞的比例：活细胞所占比例(CellViability)＝(加药组OD值)/(对照组OD值)×100％。

结果显示：过氧化氢损伤组SH-SY5Y细胞存活率为52.00±2.97％，低中高剂量样品组细胞存活率分别为55.02±2.11％、73.40±3.88％、90.33±2.50％，莲花掌苷对于由过氧化氢损伤的SH-SY5Y细胞具有较强的修复能力。上述结果表明：莲花掌苷具有较好的神经细胞修复活性，且在一定剂量范围内呈现良好的剂量依赖性关系。

2. 莲花掌苷对颈动脉血栓形成的影响：

家兔随机分为4组，每组10只，即模型组、阳性对照组(香丹组)及2个不同剂量的试验组。除模型对照组静脉给予9g/L生理盐水外，各组分别按设计剂量静脉给药，给药1h后用50g/L戊巴妥钠按0.6mL/kg耳缘静脉注射麻醉，背部固定，分离一侧颈总动脉，在相距约4cm处两端用动脉夹夹住血管，取12号细缝衣针连一根一端打结的“1”号细丝线，自近心端穿入颈总动脉，顺血管走行3cm，从远心端穿出，将另一端也打结后剪断丝线，然后缓慢松开动脉夹，恢复血流2h后将各组家兔的该段颈总动脉剪下并纵向切开，取出丝线置滤纸上，吸去余血并迅速称质量，减去丝线自身质量，即得湿血栓质量。实验结果表明：莲花掌苷抑制颈总动脉血栓的形成，降低脑缺血的风险。

制备^[2]

大黄药材中二苯乙烯类和苯丁酮类化学对照品的制备新方法，包括以下步骤：

(1)提取：将大黄药材干燥根粉碎，以1g：5mL～30mL的比例用体积浓度为30～95％的乙醇在提取温度为60～90℃、提取次数1～4次、每次1～4h的条件下进行热回流提取，合并提取液；所述提取液经除杂处理后经减压浓缩到无醇味，得到提取物浓缩液；所述提取步骤中大黄药材干燥根是指蓼科植物掌叶大黄、或唐古特大黄、或药用大黄的干燥根；

(2)富集：将所述提取物浓缩液用石油醚萃取，得到石油醚部位和水部位；将所述水部位上大孔树脂，先用10％乙醇溶液洗脱至流出液无色，再用20％～60％乙醇溶液洗脱流出液无色，得到富含目标化合物的洗脱液；将所述洗脱液减压浓缩至恒重，得到富含目标化合物的提取物粉末；

(3)分离纯化：将所述富含目标化合物的提取物粉末先用循环高速逆流色谱分离，未分离组分采用制备液相色谱分离，得到5种纯度高于98％的单体化合物。

(4)结构鉴定：将所述单体化合物通过1H-NMR和13C-NMR进行结构鉴定为3，5-二羟基-4’-甲氧基芪-3-O-β-D-葡萄糖苷、白藜芦醇-4'-O-β-D-(2”-O-没食子酰)-葡萄糖苷、白藜芦醇-4'-O-β-D-(6”-O-没食子酰)-葡萄糖苷、莲花掌苷和异莲花掌苷；所述白藜芦醇-4'-O-β-D-(2”-O-没食子酰)-葡萄糖苷和白藜芦醇-4'-O-β-D-(6”-O-没食子酰)-葡萄糖苷为同分异构体，莲花掌苷和异莲花掌苷为同分异构体。

主要参考资料

[1] CN201710819859.9莲花掌苷的新用途

[2] CN201710568073.4一种大黄药材中二苯乙烯类和苯丁酮类化学对照品的制备新方法