咖啡酰丁二胺的制备方法

背景及概述^[1]

地骨皮为茄科枸杞属植物枸杞LyciumchinenseMill.或宁夏枸杞LyciumbarbarumL.的干燥根皮，性寒，味甘，归肺、肝、肾经，具有凉血除蒸、清肺降火之功效，用于阴虚潮热，骨蒸盗汗，肺热咳嗽，咯血，衄血，内热消渴。现代药理研究表明，地骨皮具有降血压、降血糖、调血脂、抗炎、调节机体免疫、解热、抗菌及抗病毒等多重药理作用。地骨皮中含多种化学成分，其中酚类成分为地骨皮中重要成分，主要包括酚酰胺、酚酸、环肽、黄酮、苯丙素等。目前在地骨皮中发现多种酚酰胺类和酚酸类成分，如地骨皮甲素、地骨皮乙素、咖啡酰丁二胺、咖啡酰酪胺，咖啡酸、阿魏酸和绿原酸等。据报道酚酰胺与酚酸类成分具有多种活性，如降血压、抗菌、抗癌、抗氧化、抗炎等。

制备^[1]

骨皮中咖啡酰丁二胺、地骨皮乙素和绿原酸的含量测定方法：

1）对照品溶液的制备

取咖啡酰丁二胺，地骨皮乙素和绿原酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成浓度为0.4400、1.8520、0.0313g/L的溶液，摇匀即得。

2）供试品溶液的制备

取地骨皮药材粉末(过60目筛)约0.1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入70%甲醇10mL，加热回流60min，放冷，滤过，减压回收溶剂，转移至5mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得待测样品溶液。

3）色谱条件

色谱柱：WatersXbridgeC18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇(A)－0.05%三氟乙酸溶液(B)，梯度洗脱条件：0→5min，15%→18%A；5→20min18%A；20→25min，18%→22%A；25→28min，22%→24%A。流速：1.0mL/min；检测波长：290nm；柱温：30℃。在上述色谱条件下，对照品溶液和供试品溶液的色谱图见图1。

4）线性关系考察

取咖啡酰丁二胺、地骨皮乙素和绿原酸对照品混合溶液，将其依次稀释成咖啡酰丁二胺质量浓度分别为0.2200、0.1100、0.5500、0.2750、0.1375g/L，地骨皮乙素质量浓度分别为0.9260、0.4630、0.2315、0.11575、0.057875g/L，绿原酸质量浓度分别为0.1480、0.0740、0.0370、0.0185、0.00925g/L的对照品溶液，按拟定色谱条件测定各色谱峰峰面积。以进样量(X)为横坐标，色谱峰峰面积(Y)为纵坐标，分别绘制标准曲线并进行线性回归。咖啡酰丁二胺回归方程为：Y=2.3×107X－103621(r=0.9995)，在0.01375～0.2200g/L范围内线性关系良好。地骨皮乙素回归方程为Y=1.1×106X+11571(r=0.9998)，在0.057875～0.9260g/L范围内线性关系良好。绿原酸回归方程为Y=1.4×107X–55306(r=0.9995)，在0.00925～0.1480g/L范围内线性关系良好。

5）精密度考察

取地骨皮约0.1g，按“2.2供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液，重复进样6次，测定咖啡酰丁二胺、地骨皮乙素和绿原酸色谱峰峰面积，分别计算ＲSD。咖啡酰丁二胺峰面积ＲSD为0.38%(n=6)，地骨皮乙素峰面积ＲSD0.43%(n=6)，绿原酸峰面积ＲSD为0.90%(n=6)。表明仪器精密度良好。

6）重复性考察

取同一批地骨皮6份，每份约0.1g，按“2.2供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液，测定咖啡酰丁二胺、地骨皮乙素和绿原酸色谱峰峰面积，分别计算平均含量和ＲSD。咖啡酰丁二胺平均含量为0.28%，ＲSD为1.00%；地骨皮乙素平均含量为3.21%，ＲSD为0.70%，绿原酸平均含量为0.13%，ＲSD为2.78%。表明该方法重复性良好。

7）稳定性考察

取地骨皮约0.1g，按“2.2供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液，分别于制备后0，2，4，8，12，24h进样，测定咖啡酰丁二胺、地骨皮乙素和绿原酸色谱峰峰面积，分别计算ＲSD。咖啡酰丁二胺峰面积ＲSD为0.34%，地骨皮乙素峰面积ＲSD为0.43%，绿原酸峰面积ＲSD为1.21%。表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

8）加样回收率试验

精密称取已知含量的地骨皮(咖啡酰丁二胺含量0.28%，地骨皮乙素含量3.21%，绿原酸含量0.13%)约0.05g，共6份，置圆底烧瓶中，分别精密加入咖啡酰丁二胺对照品溶液(浓度为0.4400g/L)0.3mL，地骨皮乙素(浓度1.9450g/L)0.7mL和绿原酸(浓度为0.3130g/L)0.2mL，挥干溶剂。按“2.2供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液，测定咖啡酰丁二胺、地骨皮乙素和绿原酸色谱峰峰面积，分别计算回收率。结果表明，咖啡酰丁二胺加样回收率为99.25%，ＲSD为1.81%；地骨皮乙素加样回收率为101.01%，ＲSD为2.81%；绿原酸加样回收率为99.51%，ＲSD为2.32%。

9）中间精密度考察

取地骨皮约0.1g，按“2.2供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液，在不同时间，由不同的分析人员，分别采用Waters1525－2998－2707和Waters1525－2489高效液相色谱进行测定咖啡酰丁二胺、地骨皮乙素和绿原酸色谱峰峰面积，分别计算平均含量和ＲSD。

10）样品含量测定

取3批地骨皮粉末各3份，每份约0.1g，按“试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液，测定咖啡酰丁二胺、地骨皮乙素和绿原酸色谱峰峰面积，分别计算含量。

主要参考资料

[1] 地骨皮中咖啡酰丁二胺、地骨皮乙素和绿原酸含量测定方法研究*