烟酸占替诺的应用

背景及概述^[1][2]

烟酸占替诺是一种安全、有效、副作用小的黄嘌呤类血管扩张剂，化学名称为7‑[2‑羟基‑3-（2‑羟乙基‑甲氨基）]茶碱烟酸盐。烟酸占替诺可直接作用于小动脉平滑肌及毛细血管，使血管扩张，改善血液流变学，减少周围血管的阻力，促进葡萄糖透过血脑屏障，增强脑细胞的葡萄糖和氧的利用，改善大脑的糖代谢和大脑功能。还有促进脂肪代谢，降低高血脂、高胆固醇和高纤维蛋白原的作用。

适用于治疗脑血管障碍性疾病（如脑血栓形成、脑栓塞、脑外伤后遗症、脑手术后遗症、中风后遗症、颈动脉阻塞所致的缺氧性脑软化症、老年脑功能 障碍等）、冠心病、狭心症、心肌梗塞后（预防复发）、心肌炎、偏头痛、耳病性眩晕症、肢端动脉痉挛症、间歇跛行症、糖尿病性坏疽、血栓性静脉炎、静脉曲张 溃疡、肺栓塞、褥疮、冻疮和高血脂等。

制备^[1]

1. 烟酸占替诺粗品制备

向氯代物反应罐中加入环氧氯丙烷29.4kg和无水乙醇12.8kg，开搅拌，降温，当罐内温度降至20℃以下时，滴加N‑甲基乙醇胺25.5kg，使内温保持在18‑22℃。滴加完毕在18‑25℃保温反应2小时，待用。将无水乙醇215kg抽入中和罐中，开搅拌加入氢氧化钠12.1kg升温至55℃左右，缓慢加入茶碱52.1kg。升温，回流时缓慢匀速滴加氯代物，加毕保温回流1.5小时后，降温抽滤，滤液抽至反应罐，升温至回流，加入烟酸33.8kg，继续回流30分钟。反应完毕冰盐水降温至10℃，5‑10℃保温2小时，甩滤。滤饼在60‑70℃进行真空干燥，真空度为0.080‑0.085MPa，得烟酸占替诺粗品。

2. 烟酸占替诺粗品精制

向精制罐中抽入95%乙醇360kg，开搅拌，加入粗品60kg，升温，回流至全溶后，加入普通活性炭1.8kg，回流30分钟，降温，压滤至结晶罐，冰盐水降温至5℃，0‑5℃保温6小时。甩滤，滤饼在60‑70℃进行真空干燥，真空度为0.080‑0.085MPa，得烟酸占替诺成品，纯度为92%，收率为83%。

制剂^[2]

一种所述的烟酸占替诺冻干粉针的制备方法，包括以下步骤：

(1)在10～20℃温度下，依次将羟丙基-β-环糊精、甘露醇和烟酸占替诺溶解于注 射用水中，然后用氢氧化钠水溶液调节pH至6.1～6.5，再加入活性炭充分搅拌后，经过过滤 除炭和过滤除菌得到半成品原液；

(2)将步骤(1)得到的半成品原液分装后放入冻干箱中，经过如下冻干过程得到所述的烟酸占替诺冻干粉针：

(a)预冻：在-30℃～-40℃时预冻1-3小时；

(b)升华：在小于14Pa的压力下，0℃～-10℃时进行升华，直到冰晶消失后再保持 1-5小时；

(c)加热干燥：升温至20℃～25℃并在该温度范围保持1-5小时进行加热干燥，得到成品。

检测^[3]

液质联用检测中成药及保健食品中烟酸占替诺：

(1)制备对照品溶液：取烟酸占替诺对照品用甲醇溶解配制成浓度为1mg/ml的烟 酸占替诺溶液，然后取1ml烟酸占替诺溶液制量瓶中，用甲醇定容至100ml，得到烟酸占替诺 对照品溶液。

(2)制备待测样品溶液：液体制剂的配置方法：精密吸取相当一次口服剂量，置 50ml量瓶中，加入20ml 50％甲醇水溶液，于1130W，37kHz条件下下超声处理15min，放冷，用 50％甲醇水溶液定容至刻度，摇匀，取1ml溶液加水稀释10倍，作为供试品溶液待用。

固体制剂的配置方法：取固体制剂供试品研细，精密称取相当于一次口服剂量，置 100ml锥形瓶中，精密加入50ml 50％甲醇水溶液，称重，于1130W，37kHz条件下下超声处理 15min，放冷，用50％甲醇水溶液补足重量，取1ml上清液加水稀释10倍，作为供试品溶液待用。

软胶囊制剂的配置方法：精密称取相当于一次口服剂量软胶囊，置100ml锥形瓶 中，精密加入50ml 50％甲醇水溶液，称重，于1130W，37kHz条件下下超声处理15min，放冷， 用50％甲醇水溶液补足重量，置于4℃冰箱放置2.5h，将溶液转移至离心管，4000r·min^-1离心5min，取1ml上清液加水稀释10倍，作为供试品溶液待用。

净化过程如下：精密量取供试品溶液1ml以1ml·min^-1流速通过活化后的C18-SPE 柱，用2ml 50％甲醇-水洗脱，合并流出液与洗脱液，并定容至5ml，用0.22μm有机滤膜过滤， 即得待测样品溶液。

(3)取对照品溶液和待测样品溶液上液质联用仪对供试品溶液中的烟酸占替诺进 行定性定量测定，其中，

色谱条件：3.0mm×100mm，1.8μm，Eclipse XDB C18色谱柱，流速：0.30ml·min^-1， 柱温：40℃，进样量:1μl；ESI正模式：流动相A为0.1％甲酸溶液，流动相B为甲醇；梯度洗脱 程序：0～2min，92％A、10％B；2～10min，92％～8％A、8％～92％B；10～13min，10％A、92％ B；在90％A、10％B下平衡2min；ESI负模式：流动相A为水，流动相B为乙腈；梯度洗脱程序：0～0.5min，85％A、15％B；0.5～3min，85％～10％A、15％～90％B；3～5min，15％A、85％B；在 85％A、15％B下平衡2min；

质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，正负离子模式，多反应监测(MRM)扫描方式：m/z为 313.1/130.1，碎裂电压131V，碰撞能20V，保留时间2.1min，干燥气温度：360℃，雾化器压力：40Psi，干燥气流速：10L·min^-1。

(4)线性关系考察：精密吸取5μg·ml-1烟酸占替诺对照品溶液20，50，80，120，160，200μl，置6个10ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，即得6个浓度水平的混合对照溶液，分别为10，25，40，60，80，100ng·ml^-1，各取1μl，按上述步骤(3)的液质联用条件进样分析， 平行测定2次，以峰面积(Y)对质量浓度(X，ng·ml^-1)进行线性回归，得到回归方程Y＝22.78X+171.85和相关系数r＝0.9980，表明烟酸占替诺在11.80～135.6ng·ml^-1范围内线性关系良好。

(5)检测限将烟酸占替诺对照品溶液逐步稀释后，按上述步骤(3)的液质联用条件 测定，按S/N＝3计算各化学成分的检测限为2ng·ml^-1。

(6)精密度试验：取烟酸占替诺对照品溶液，浓度为100ng/ml，采用步骤(3)的液质联用条件进样6次，结果烟酸占替诺的峰面积的RSD少于2.5％(n＝6)，说明仪器精密度良好。

(7)稳定性试验：取烟酸占替诺对照品溶液，浓度为100ng/ml，分别在0，1，8，12和 24h按照步骤(3)等液质联用条件进样，考察溶液稳定性，结果表明，烟酸占替诺在24h内稳定。

(8)加样回收率试验:取1个烟酸占替诺空白样品，加入烟酸占替诺对照品约50μg，按待测样品溶液制备方法平行制备6份待测样品溶液，按上述步骤(3)的液质联用条件进样并测定回收率。结果显示烟酸占替诺的加样回收率范围为98％～102％，RSD小于5％(n＝ 6)。

(9)样品测定：共取口服液4批、软胶囊6批，硬胶囊3批和片剂2批，按步骤(2)制备待测样品溶液，按上述步骤(3)液质条件进样检测，结果15批样品中烟酸占替诺均未检出。

主要参考资料

[1] [中国发明,中国发明授权] CN201110022478.0 一种烟酸占替诺的合成方法

[2] [中国发明,中国发明授权] CN201510555375.9 烟酸占替诺注射用组合物、烟酸占替诺冻干粉针及其制备方法

[3] [中国发明] CN201711365095.7 液质联用检测中成药及保健食品中烟酸占替诺的方法