豆蔻明的主要应用

背景及概述^[1]

豆蔻明(cardamonin，CDN)，结构为2'，4'-二羟基-6'-甲氧基查尔酮，主抗血小板聚集、抗肿瘤、抗诱变、抗炎、抗氧化和抗菌等多种生物活性。大量研究表明，豆蔻明对炎症介质前列腺素E2(PGE2)、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF)-ɑ、白介素(IL)-1β和IL-6的抑制作用与抑制NF-κB信号通路有关。TLＲ4是NF-κB的上游调控基因，有关豆蔻明对TLＲ4/NF-κB信号通路的调节作用仅见于我们前期的研究报道：豆蔻明对小鼠结肠黏膜炎性损伤的保护作用，可能与下调结肠组织的TLＲ4表达、抑制NF-κB及丝裂原活化蛋白激酶活性和减少炎症介质释放有关。

豆蔻明的提取方法目前主要有乙醇提取法、乙醚提取法、丙酮提取法、氯仿提取法等，采用硅胶柱层析。这些提取分离方法得到的小豆蔻明含量较低，得率低，提取时间长，一般作为化学成分研究实验室少量制备方法。史道华等采用95％乙醇浸渍3天，以8倍量乙醇回流2次，每次2小时，减压回收乙醇得600ml浓缩液，浓缩液制成水混悬液后用乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，萃取液减压回收溶剂，浓缩后得340g浸膏，浸膏溶于适量丙酮，拌样，用相当于固体5倍量的硅胶湿法装柱，石油醚-乙酸乙酯系统洗脱，收集各洗脱部分，与对照品在同一薄层板上点样，分别以甲苯-乙酸乙酯-甲醇(15∶4∶1)、三氯甲烷-甲醇(20∶1)展开，紫外灯(波长365nm)下观察，合并于对照品相应位置出现暗斑的馏分，常压浓缩得13g混晶。混晶再过硅胶柱，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯-丙酮系统，浓缩后得5g晶体。取100g凝胶用甲醇溶胀过夜，装柱，晶体溶于甲醇后取20ml上柱，按每份3ml进行收集，薄层(TLC)分析并用标准品对照，合并相同馏分后浓缩，得橙黄色针状晶体4.2g，该方法虽然比丙酮提取法有显著提高，提取率为0.084％，但提取率仍然很低，提取时间长，有机溶剂萃取萃取率低、损失较大。

应用^[2-3]

早在1948年就研究报道了山姜素等二氢黄酮类和查耳酮类化合物的杀虫活性，结果表明豆蔻明等查耳酮的作用缓慢而持久。于1993年研究报道了姜科4种植物根茎的杀虫成分，结果表明豆蔻明活性较弱。对38种泰国可食用和药用植物的40份甲醇提取物抑制非洲淋巴瘤细胞病毒(EB病毒)诱导肿瘤形成的作用进行研究，发现Boesenbergiapardurata根茎中的豆蔻明是一个极具潜力的肿瘤形成抑制剂，他们于1994年在日本申请了专利，大量生产主含豆蔻明的食品和饮料。通过对小鼠角叉菜胶诱导产生跖部水肿的抑制作用来研究黄酮类化合物的口服抗炎活性，结果表明A环上的C5和C7位上的甲氧基、吡喃环B的存在是抗炎活性的必要结构特征，豆蔻明等查耳酮几无抗炎活性。番荔枝科植物假鹰爪Desmoschinesis中豆蔻明对大多数细菌有显著抑制作用。研究云南草蔻Alpiniablepharocalyx果实中8个化合物的抗血小板聚集活性，结果表明豆蔻明对花生四烯酸(AA)引起的血小板聚集有较强的抑制作用，对胶原(collagen)、二磷酸腺苷(ADP)和瑞斯托菌素(ristocetin)引起的血小板聚集有不同程度的抑制作用。

此外，豆蔻明对TLＲ4/MyD88/NF-κB/iNOS信号通路的调节作用。利用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）处理RAW264.7细胞建立炎性细胞模型并分组：正常对照组（Vehicle组）、模型组（LPS组）和药物处理组（LPS+CDN组）；CCK-8方法检测细胞活力，Griess法检测细胞培养上清一氧化氮（nitricoxide，NO）含量，RT-PCR检测诱导型NO合成酶（induciblenitricoxidesynthase，iNOS）、环氧化酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）、单核细胞趋化蛋白-1（monocytechemotacticprotein1，MCP-1）、肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactor，TNF）-ɑ、白介素（interleukin，IL）-1β和IL-6的mRNA表达，Westernblot检测iNOS、TLR4、髓样分化因子88（myeloiddifferentiationfactor88，MyD88）、核因子-κB（nuclearfactorκB，NF-κB）phosphorylated（p）-p65、inhibitorκBα（IκBα）和p-IκBα的蛋白表达。结果1⁵0μmol·L^-1豆蔻明对RAW264.7细胞没有毒性，但可以剂量依赖性抑制LPS诱导的NO分泌和iNOS、COX-2、MCP-1、TNF-α、IL-1β及IL-6的mRNA表达，25μmol·L-1豆蔻明可下调LPS诱导的iNOS、TLR4、MyD88、p-NF-κBp65和p-IκBα蛋白表达及抑制IκBα降解。结论豆蔻明通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB/iNOS信号通路从而抑制NO的产生。

制备^[4]

一种提取率高、周期短、高纯度的小豆蔻明的提取方法，具体包括以下步骤：

a.提取步骤：取适量草豆蔻种子，粉碎至20-60目，以冷渗、温浸或回流提取法，将草豆蔻种子粉以溶剂提取1-3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏；

b.有机溶剂萃取步骤：将浸膏用石油醚萃取至萃取液近无色，弃去石油醚萃取液，保留剩余浸膏；

c.分离纯化步骤：将剩余浸膏采用柱层析分离，用水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷或它们的混合溶液洗脱，高效液相色谱监测，收集含小豆蔻明的流出液，此流出液经浓缩后用有机溶剂结晶即可获得高纯度小豆蔻明。

主要参考资料

[1] 豆蔻明对TLR4/MyD88/NF-κB/iNOS信号通路的调节作用

[2] 比较研究山姜素和豆蔻明与人-γ球蛋白的相互作用

[3] 山姜素和豆蔻明的研究概况

[4] CN201010235806.0一种从草豆蔻中提取小豆蔻明的方法