土克甾酮的制备

背景及概述^[1]

露水草(CyanotisarachnoideaC.B.Clarke)，又名珍珠露水草，鸡冠参等，系鸭趾草科兰耳草属多年生草本植物，广泛分布于云南省，具有补虚，除湿，舒筋活络之功效。实验通过Al2O3柱色谱，制备性薄层色谱，高效液相色谱，从露水草的乙醇提取物中分离得到3种植物甾酮类成分，经UV、ESI-MS、1HNMR、13CNMR、1H-1HCOSY、HMBC、HMQC鉴定分别为罗汉松甾酮C(podecdysoneC)(1)，土克甾酮(turkesterone)(2)，β-蜕皮甾酮(3)，其中土克甾酮从该植物中首次分离得到。

制备^[1]

露水草(2.5kg)用75%乙醇加热回流提取，回收乙醇，得浓缩液。用乙酸乙酯、正丁醇萃取；取乙酸乙酯萃取物，行Al2O3(中性)柱色谱，以氯仿-甲醇梯度洗脱，氯仿-甲醇(4∶1)洗脱部分经乙酸乙酯-甲醇重结晶，得化合物3(200mg)；3∶1洗脱部分经制备性薄层色谱(固定相：硅胶GF254；流动相：氯仿-甲醇=5∶1)得化合物1(10mg)；以甲醇洗脱部分经制备性高效液相色谱(ODS，甲醇/水=31∶69，242nm检测)分离得土克甾酮(5mg)。

土克甾酮：白色结晶，mp：172～174℃(MeOH)。Liebermann-Burchard反应阳性，表明其具有甾体母核。ESI-MS质谱中给出准分子离子峰497[M+H]+，结合碳谱、氢谱，推测该化合物的分子式为C27H44O8。氢谱中给出5个甲基单峰信号(δ1.26，1.32，1.35，1.35，1.57)，一个烯氢质子信号δ6.29(1H，br.s)。碳谱中共给出27个碳信号，其中有7个连氧碳信号(δ84.3，77.5，76.8，69.5，68.9，68.4，68.2)，一个α、β不饱和羰基碳信号δ203.9，以及δ164.3和δ122.3处的双键碳信号。

结合其他碳氢信号，推测该化合物为植物甾酮类成分。由δ68.4，δ68.2的2个连氧碳信号，推测该化合物存在2β，3β-二羟基；δ84.3的连氧碳信号说明土克甾酮的结构中存在14α-羟基；δ68.9的连氧碳信号推测土克甾酮的结构中存在11α-羟基。将该化合物的碳谱数据与的筋骨草甾酮C(2β，3β，11α，14α，20R，22R-六羟基-胆甾-6-羰基-7-烯)的碳谱数据相比，发现该化合物的C1-C19的化学位移基本一致，说明化合物的甾体母核与筋骨草甾酮C一致；同时将其碳谱数据与β-蜕皮甾酮的进行比较，发现两者的C20-C27化学位移值基本相同，说明土克甾酮的侧链结构与β-蜕皮甾酮一致。

根据以上推测，确定化合物2的结构为2β，3β，11α，14α，20R，22R-六羟基-胆甾-7-烯-6-酮(2β，3β，11α，14α，20R，22R，25-hepta-hydroxy-cholest-7-en-6-one)，将该化合物的碳、氢谱数据与文献中土克甾酮(turkesterone)的数据比较基本一致，故鉴定该化合物为土克甾酮(turkesterone)。1HNMR(300MHz，C5D5N)：δ6.29(1H，br.s，H-7)， 1.26(3H，s，H-18)， 1.32(3H，s，H-19)， 1.57(3H，s，H-21)， 1.35(6H，s，H-26，27)。 13CNMR(75MHz，C5D5N)。

主要参考资料

[1] 露水草中的植物甾酮类成分