AFICAMTEN的合成方法

发布日期:2026/10/31 8:00:52

技术背景

AFICAMTEN，又称CK-274，是一种新型选择性小分子心肌肌球蛋白抑制剂。其作用靶点是直接结合心肌肌球蛋白头部的变构位点，把肌球蛋白“锁定”在弱结合/非活性状态，减少肌球蛋白–肌动蛋白横桥数量，降低心肌过度收缩、减轻左室流出道梗阻（LVOT），同时改善舒张功能。

AFICAMTEN

AFICAMTEN的合成方法

AFICAMTEN的合成方法较为繁杂，可参考赛特凯恩蒂克公司所采用的方法[1]。其主要方法步骤包括如下步骤：

（1）(R)‑N‑(5‑氰基‑2,3‑二氢‑1H‑茚‑1‑基)‑1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酰胺的合成

向反应器中装入1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酸(12.2kg，96.73mol，1.00当量)、2‑MeTHF(76.9kg，89.4L)和DMF(62.9g，66.6mL，0.861mol，0.0089当量)。在至少45分钟的时段内缓慢添加草酰氯(11.7kg，91.89mol，0.95当量)，同时将温度保持低于35℃。将传输管线用2‑MeTHF(6.1kg)冲洗，并将冲洗液送至反应器。将所得混合物在30±5℃下搅拌。在30±5℃下搅拌至少8小时(实际反应时间：19.3h)后，取出IPC样品并经由HPLC进行分析。当满足IPC(规格：1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酸≤15％面积；结果为9.6％1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酸)时，认为反应完成。所述反应混合物无需后处理即直接用于合成(R)‑N‑(5‑氰基‑2,3‑二氢‑1H‑茚‑1‑基)‑1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酰胺。将固体NaOH(14.6kg，366.0mol，3.78当量)溶解于78.3kg水中。

向单独反应器中装入(R)‑1‑氨基‑2,3‑二氢‑1H‑茚‑5‑甲腈盐酸盐(17.9kg，91.89mol，0.95当量)和2‑MeTHF(63.9kg，74.3L)。将经制备的4N NaOH溶液(92.9kg)添加到混合物中，同时将温度保持<30℃。将含有NaOH溶液的滚筒用水(12.2kg)冲洗，并将冲洗液转移到反应容器中。将混合物在20℃下搅拌30min，并获得澄清的两相溶液。在至少20min的时段内将经制备的于2‑MeTHF中的1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酸和酰氯溶液缓慢转移至无胺溶液中，同时将内部温度保持<30℃。将用于酰氯的反应器用2‑MeTHF(12.2kg，14.2L)冲洗并将冲洗液添加到反应混合物中。添加酰氯后，形成大量固体。将所得混合物在20±5℃下搅拌至少5小时(实际反应时间：17.8小时)，并且当满足IPC(规格：(R)‑1‑氨基‑2,3‑二氢‑1H‑茚‑5‑腈≤5％；结果0.7％)时，认为反应完成。通过过滤收集固体产物(R)‑N‑(5‑氰基‑2,3‑二氢‑1H‑茚‑1‑基)‑1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酰胺，并将湿滤饼用2‑MeTHF(24.4kg，28.4L)、水(3×211.5kg，1x36.6kg)洗涤。测试在最后一次水洗后滤液的pH(规格：pH 8.5±1.5；结果pH 8.7)。将物质在<45℃、真空下，在缓慢氮气排放下，在盘式干燥器中干燥至少20小时，直至满足LOD(规格：≤3％w/w；结果：0.8％w/w)。将产物干燥64.7小时，得到21.5kg产物(R)‑N‑(5‑氰基‑2,3‑二氢‑1H‑茚‑1‑基)‑1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酰胺（纯度：99.4%，收率：87.8％)）。

（2）(R)‑N‑(5‑(N'‑羟基脒基)‑2,3‑二氢‑1H‑茚‑1‑基)‑1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酰胺的合成

将(R)‑N‑(5‑氰基‑2,3‑二氢‑1H‑茚‑1‑基)‑1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酰胺(21.0kg，78.86mol，1.00当量)的NMP(108.2kg，105.3L，5.0体积)溶液冷却至5±5℃，并在至少10min的时段内缓慢添加50％羟胺水溶液(15.6kg，236.58mol，3.00当量)，同时将内部温度保持≤10℃。在至少2h的时段内将混合物缓慢升温至20±5℃，并在20±5℃下搅拌至少16h(实际反应时间：19.7h)。获取反应完成的IPC(规格：≤2％CK‑3834025，结果：0.05％CK‑3834025，0.65％副产物酰胺)。

反应完成后，将混合物加热至65±5℃(澄清溶液)。在至少1小时的时段内缓慢装入IPAc(182.8kg，209.6L，10.0体积)，同时将内部温度保持≥50℃。添加IPAc后，形成大量固体。将所得混合物在60±5℃下搅拌1h。在4h的时段内将混合物缓慢冷却至20±5℃，并在20±5℃下搅拌至少8小时(实际时段：搅拌15.3h)。经由过滤收集固体。将湿滤饼用IPAc[2×98.8kg(2×113.3L，2×5.4体积)]洗涤。最初将所述物质通过抽真空在过滤器上干燥至少1h。取出(R)‑N‑(5‑(N'‑羟基脒基)‑2,3‑二氢‑1H‑茚‑1‑基)‑1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酰胺湿滤饼样品并经HPLC进行分析。结果：99.49％产物(R)‑N‑(5‑(N'‑羟基脒基)‑2,3‑二氢‑1H‑茚‑1‑基)‑1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酰胺，0.27％副产物酰胺。未检测到起始材料(R)‑N‑(5‑氰基‑2,3‑二氢‑1H‑茚‑1‑基)‑1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酰胺。将物质在真空盘式干燥器中在≤50℃下干燥至少24h(实际干燥时间：24.3h)，直至满足LOD规格(规格：LOD≤1％w/w；结果：0.10％w/w)。获得共21.8kg(R)‑N‑(5‑(N'‑羟基脒基)‑2,3‑二氢‑1H‑茚‑1‑基)‑1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酰胺（纯度：99.5%，收率：92.4%）。

（3）AFICAMTEN的合成

向反应器(容器1)中装入CDI(11.9kg，73.67mol，1.05当量)和CH3CN(131.4kg，167.2L)，并用丙酸(5.7kg，77.18mol，1.10当量)处理所得混合物，将温度保持<25℃。将传输管线用CH3CN(10.2kg，13.0L)冲洗，并将冲洗液转移到主体反应混合物中。将所得澄清溶液在20±5℃下搅拌至少1h。当满足IPC(规格：游离丙酸≤20mol％，通过1H NMR；结果：4.8％游离丙酸)时，认为反应完成。

向单独反应器(容器2)中装入(R)‑N‑(5‑(N'‑羟基脒基)‑2,3‑二氢‑1H‑茚‑1‑基)‑1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酰胺(21.0kg，70.16mol，1.00当量)和CH3CN(40.4kg，51.4L)。将容器1中新鲜制备的活性咪唑溶液转移至容器2。将容器1用CH3CN(20.2kg，25.7L)冲洗，并将冲洗液转移至容器2。将混合物加热至50±5℃。将反应物在此温度下搅拌至少12小时(实际反应时间：16.6小时)。所述混合物是易于搅拌的浆液。获取IPC样品(规格：(R)‑N‑(5‑(N'‑羟基脒基)‑2,3‑二氢‑1H‑茚‑1‑基)‑1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑甲酰胺≤2％，结果：0.28％)。

然后向反应物中装入DBU(21.4kg，140.32mol，2.00当量)。将传输管线用CH3CN(6.5kg，8.3L)冲洗，并将冲洗液转移到主体溶液中。将温度调节至70±5℃，并将混合物在70±5℃下搅拌至少2h，直至满足IPC(规格：咪唑中间体≤2面积％；结果：0.16％咪唑中间体)。

通过添加水(64.6kg)来淬灭反应混合物，同时将温度保持≥50℃。将温度调节至55±5℃并精滤。将溶液在≤50℃但不低于10℃的温度下浓缩，直到批次体积为约200L。将浓浆液加热至75±5℃，并用水(417.3kg)稀释澄清溶液，同时将温度保持≥70℃。将温度调节至75±5℃，并将混合物在75±5℃搅拌2h。然后在至少4h的时段内将混合物缓慢冷却至20±5℃。将混合物在20±5℃下搅拌至少2h(实际反应时间：11.5h)。过滤收集固体并将湿滤饼用水(3×161.5kg)洗涤。将固体在≤50℃下，在缓慢氮气排放下，在真空烘箱中干燥至少24h(实际干燥时间：48h)并分析LOD(规格：LOD≤1％w/w；结果：LOD 0.05％w/w)。得到AFICAMTEN产品22kg（纯度：100%，收率92.8%），然后将产物(22.0kg)去结块，以得到21.4kg(97.3％)。