AIF 抗体在AIFM1依赖的氧死亡研究中的作用

AIF，即线粒体凋亡诱导因子1（AIFM1），是定位于线粒体内膜间隙的氧化还原酶，在凋亡相关刺激下，AIFM1可以作为半胱天冬酶非依赖途径中的促凋亡因子，介导染色质浓缩和大规模DNA降解^[3]。氧死亡（oxeiptosis）是活性氧诱导、不依赖于caspase级联反应的新型细胞死亡方式，受KEAP1/PGAM5/AIFM1与KEAP1/NRF2信号通路的调控^[2]。过度活化的KEAP1以NRF2非依赖方式，通过PGAM5介导AIFM1第116位丝氨酸残基去磷酸化，自发性介导氧死亡的发生^[2]。AIF 抗体是识别并定量该蛋白表达水平、磷酸化状态与亚细胞定位的基础工具，其特异性决定结论判断的可靠性。

从技术方面来看，AIF 抗体的应用贯穿了蛋白免疫印迹（WB）、酶联免疫吸附试验、免疫共沉淀与免疫荧光等多种实验体系。主要分为多克隆抗体和单克隆抗体两种。多克隆抗体通常通过用合成肽段（如人AIF的121-613位氨基酸或C端593-613位氨基酸）免疫兔子制备，经亲和层析纯化，可识别AIF的多个表位，具有较高的亲和力。单克隆抗体通过杂交瘤技术制备，识别单一表位，特异性高，批次间一致性好。

有研究将AIF 抗体用于噪声性听力损失（NIHL）的机制解析。该研究纳入噪声暴露人员44人、正常对照41人，纯音测听显示噪声暴露组双耳高频平均听阈达27.23±13.76 dB，听力损失总发病率为45.4%。经大规模血浆蛋白质数据库分析与ELISA验证，噪声暴露组血浆AIFM1降低，与正常对照组血浆AIFM1水平存在统计学差异^[1]。在HEI-OC1细胞模型中，模拟噪声损伤可触发KEAP1与PGAM5分离并促进AIFM1去磷酸化，导致细胞发生氧死亡。抑制AIFM1去磷酸化则可提高细胞存活率，增强细胞对氧化应激的抵抗能力，降低ROS水平、减少LDH释放、提高ATP含量以及增加细胞活性^[1]。该研究进一步通过单细胞转录组测序得出结论，AIFM1-SPARC-cGAS-STING通路介导耳蜗外毛细胞氧死亡^[1]。

另有实验将AIF 抗体应用于肝细胞癌（HCC）氧死亡机制研究。生物信息学分析发现，PGAM5高表达肝癌患者总生存时间较低表达患者更长。在8对临床HCC组织与癌旁组织样本中，相较于癌旁组织，肿瘤组织KEAP1与PGAM5表达显著降低，NRF2表达显著升高，p-AIFM1蛋白水平显著升高^[2]。经200 μmol/L人参皂苷Rb1（Gn-Rb1）干预后，HepG2细胞迁移能力与集落形成能力显著降低，LDH水平显著升高。蛋白水平检测显示，Gn-Rb1组KEAP1、PGAM5表达显著升高而NRF2显著降低，p-AIFM1蛋白表达显著降低^[2]。研究指出，HCC组织中氧死亡被抑制，而Gn-Rb1能够通过调控KEAP1/PGAM5/AIFM1通路促进HepG2细胞氧死亡的发生，抑制细胞增殖和迁移能力^[2]。

通过低氧培养构建体外肺动脉高压（PAH）模型，来探讨miR-22-3p与AIFM1对肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）线粒体稳态和凋亡的影响。其结果显示，低氧诱导下，PASMCs的线粒体活性氧（ROS）含量升高，ATP水平下降，线粒体裂变增加，细胞凋亡减少。AIFM1过表达能够改善线粒体稳态，并增加细胞凋亡^[3]。双萤光素酶报告基因实验证实，miR-22-3p直接作用于AIFM1的3'UTR，负调控AIFM1并逆转其过表达效应^[3]。该研究以AIF 抗体经免疫印迹检测AIFM1表达，并结合流式细胞术与线粒体荧光探针评价细胞凋亡和线粒体功能，因此，实验结果表示，AIFM1是1个潜在的PAH治疗和干预靶点^[3]。

AIF 抗体检测结果的解释仍存在若干技术边界。其一，AIFM1主要定位于线粒体内膜间隙，当总蛋白水平不变而亚细胞定位发生改变时，仅凭免疫印迹定量易产生误判，需结合免疫荧光与核质分离实验相互验证。其二，p-AIFM1与总AIFM1的比值通常较单一指标更能反映氧死亡活性。其三，小鼠Aifm1第115位丝氨酸对应人源第116位，跨物种比较时应特别注意位点编号差异。

参考文献

[1] 张鑫雨. AIFM1依赖的氧死亡在噪声性听力损失中的作用及机制研究[D]. 西安: 空军军医大学, 2026.

[2] 朱敬轩, 宋囡, 杨莹, 等. 人参皂苷Rb1通过KEAP1/PGAM5/AIFM1通路促进肝细胞癌HepG2细胞发生氧死亡[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志, 2024, 31(5): 445-451. 

[3] 向渝静, 唐胡婷, 安永. miR-22-3p通过靶向AIFM1调控低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞线粒体稳态和凋亡[J]. 重庆医科大学学报, 2025, 50(11): 1531-1540.