KCNH3抗体在心肌钾电流与脑干定位研究中的应用

KCNH3抗体是用于科研的兔多克隆抗体，主要靶向电压门控钾离子通道KCNH3（又称Kv12.2、BEC1、ELK2）。它主要用于神经科学研究，因为KCNH3蛋白在大脑前脑区域特异性高表达。

邹安若的博士学位论文第一部分研究移植心脏心肌细胞的钾通道，模型是异位、有血管化但不做功的移植心脏，分为同源非排斥（BALB/c到BALB/c）与异源排斥（BALB/c到C3H）两组，读数有三种电流：瞬时外向钾电流（Ito）、持续外向钾电流（Isus）与内向整流钾电流（IK1）^[2]。结果是细胞膜电容无变化而细胞容积减少35%，动作电位幅度无显著变化但静息膜电位去极化、时程延长。排斥性移植中Ito、Isus、IK1均减少，非排斥移植中只有Isus减少^[2]。研究中检测的是是通道整体通过多少电流，如果要检测电流来自哪一个亚型，则需要用上KCNH3抗体的检测数据。

第二部分转向人KCNH8通道的分布与功能性质。从人脑cDNA克隆了KCNH8、KCNH3、KCNH4、KCNH6（Eag2）与KCNH7（Erg3），把孔道区的GFG基序定点突变为AAA，造出各亚型的显性负性（DN）构建体，在爪蟾卵母细胞上用双电极电压钳记录^[2]。KCNH8通道的半最大激活电位为负62.4±1.2 mV，反转型电位在正常ND96中为负93±1.5 mV、在高钾液中为负44.4±3.0 mV，斜率为每十倍48 mV，符合钾选择性通道的特征^[2]。KCNH3-DN用来与KCNH8、KCNH4共表达，判断Elk亚基能否相互组装，结论是Elk亚基之间可以共组装，而KCNH3-DN不影响KCNH5、KCNH7与KCNB1的表达^[2]。若研究更进一步，KCNH3抗体能检查出其蛋白量与表达位置等数据。

用免疫荧光与免疫印迹同时检测Kv12三成员在孤束核的表达，Phox2b用Santa Cruz的小鼠单克隆抗体sc-376993，GAPDH用Affinity的T0022（1:3000），二抗为Cy3标记山羊抗小鼠与FITC标记驴抗兔，均1:200^[1]。三个亚型里KCNH3抗体在两种场景被换过一次，提示同一抗体未必能同时胜任固定后原位与变性电泳两种条件。

从卵母细胞上的显性负性亚基和孤束核切片上的膜着色，KCNH3的检测方式从分为功能推断和抗原识别，为KCNH3抗体制定核对手续时，四项参数值得固定：一是亚型归属，本批同时涉及Kv12家族三个成员，旁系同源干扰是现成背景，宜用同家族其他亚型的表达裂解液作交叉反应对照。二是场景分别标定，同一靶点在免疫荧光与免疫印迹各用一支抗体时，工作浓度不能互推。三是膜蛋白样品处理，Kv家族属多次跨膜蛋白，高温与反复冻融易致聚集。四是内部对照，省略一抗的阴性对照、同片共染的核标记与预测分子量处单一条带，三者合起来才是完整的特异性依据。

参考文献

[1] 马兰, 康奥琦, 刘巍, 等. 小鼠孤束核Phox2b神经元表达电压门控钾离子通道Kv12[J]. 生理学报, 2021, 73(2): 217-222.

[2] 邹安若. 心肌萎缩对大鼠心肌移植细胞钾通道的影响[D]. 武汉: 华中科技大学, 2004.