ABCF2抗体在妇科肿瘤免疫组化研究中的应用探索

ABCF2是三磷酸腺苷（ATP）结合盒转运蛋白家族F2成员，与家族中多数成员不同，它含有一对核酸结合区域却缺少跨膜区，因此并不承担跨膜外排功能，而是参与翻译起始与延长的调控、抗生素耐药及RNA酶L抑制等过程^[1]。正因为这一结构特点，ABCF2的功能状态很难从转运活性间接推断，只能落到蛋白层面直接观察，这也是ABCF2抗体在妇科肿瘤研究中反复出现的原因。ABCF2抗体是针对ABCF2蛋白（ATP结合盒转运蛋白超家族F成员2）的特异性抗体，主要用于科研领域研究该蛋白的功能与表达。

在分析了北京大学人民医院94例子宫内膜腺癌与20例正常子宫内膜，发现ABCF2在Ⅲ期及以上患者中的表达明显高于Ⅱ期及以下者（P<0.05），而与年龄、病理学分级、肌层浸润深度、淋巴结转移状态及ER、PR、P53、PTEN表达均无明显相关。该组前期用基因芯片筛选时，ABCF2在Ⅲ期肿瘤中的表达量约为Ⅰ期的3.2倍^[1]。方法学上，鼠抗ABCF2单抗阳性试剂盒为PV6000、显色用DAB，一抗工作浓度1:100、4 ℃过夜，以PBS替代一抗作阴性对照。本实验中将ABCF2抗体染色结果判读为表达位于细胞质，正常内膜仅在分泌期与增生期腺体细胞中呈微弱表达^[1]。

以94例卵巢癌手术标本为对象，采用免疫组化SP法，一抗为鼠抗人ABCF2单克隆抗体、稀释浓度1:75，切片经微波修复后以3%过氧化氢阻断18 min、10%山羊血清封闭10 min，一抗4 ℃过夜，次日滴加抗鼠与兔二步法抗体孵育18 min，DAB显色，并以积分光密度（IOD）值定量^[2]。该组化疗敏感73例、化疗耐药21例，均接受紫杉醇类联合铂类方案化疗6~8个疗程后随访。该研究把ABCF2抗体的判读标准为阳性定位于细胞核、呈棕褐色团块状或颗粒状物质。结果显示，ABCF2阳性表达与肿瘤病理类型和组织分级无关，与肿瘤分期及化疗耐药情况有关（P均<0.05）。多因素Logistic回归中，ABCF2与ABCG2阳性表达均为化疗耐药的独立影响因素，OR分别为1.067与1.132^[2]。

针对91例卵巢癌切除标本，并取42例距肿瘤5 cm的癌旁组织作对照，免疫组化染色同样以ABCF2抗体为核心试剂：一抗为鼠来源ABCF2抗体，37 ℃孵育2 h，此前以3%过氧化氢室温孵育5 min、10%牛奶蛋白室温封闭5 min，二抗为兔来源HRP标记抗体，37 ℃孵育30 min，NBT/BCIP显色5 min^[3]。对ABCF2抗体的结果判定采用着色细胞评分与染色强度评分相加的半定量方式，两项之和>3分判为阳性，染色定位同样记录为细胞核。结果显示，卵巢癌组织ABCF2阳性率明显高于癌旁组织。Ⅲ~Ⅳ期患者阳性率高于Ⅰ~Ⅱ期。化疗耐药者阳性率高于化疗敏感者。Logistic回归中ABCF2阳性表达是化疗耐药的独立影响因素^[3]。

对复用ABCF2抗体的实验室而言，以上文献提供了可核对的参照系。固定批次与修复方案，先在1:75~1:100区间做浓度梯度预实验，封闭剂在山羊血清与牛奶蛋白之间保持一致，并在同批切片内设置癌与癌旁的配对内部对照、以PBS替代一抗的阴性对照同步染色，判读时对核与胞质着色分别记录、统一阈值后再归并。靶点自身的结构也支持这种谨慎，ABCF2缺少跨膜区、主要参与翻译调控，其在细胞内的分布本就不宜用单一区室来概括^[1]。当ABCF2抗体的表位信息、修复条件与判读标准在同一实验室固定下来，分期进展与化疗耐药两项结论才具备跨批次的可比性，这也是上述研究结果能被后续工作复用的前提。对以抗体染色为唯一读出手段的研究，批次可追溯往往非常值得关注。

参考文献

[1] 赵丽君, 李小平, 王建六, 等. 子宫内膜癌中ATP结合盒基因超家族F2表达的临床意义[J]. 中国妇产科临床杂志, 2012, 13(1): 40-42.

[2] 宋静, 赵云霞, 田永杰. 卵巢癌组织中ABCF2、ABCG2阳性表达及意义[J]. 山东医药, 2016, 56(8): 65-67.

[3] 陈旭伟, 朱滔, 厉华卿. ABCF2在卵巢癌组织中的阳性表达及其与化疗耐药的关系[J]. 中国生化药物杂志, 2017, 37(3): 285-287.