(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵基脂质纳米粒的多元制备及生物医用性能研究

发布日期:2026/10/9 8:01:08

(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵（DOTAP）为双链阳离子脂质，含季铵正电头部，可静电结合阴离子物质，常与辅助脂质复配构建脂质纳米载体。广泛用于CRISPR核酸递送、化疗药pH响应纳米制剂及疫苗佐剂，能提升细胞摄取，增强基因转染与免疫激活效果。

(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵

应用研究

sgCLNPs的制备及表征：使用阳离子脂质(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵（ 2, 3-dioleoxy propyl trimethyl ammonium chloride，DOTAP）、胆固醇（Cholesterol，Chol）、二油酰基L-α-磷脂酰乙醇胺（1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine，DOPE）以及二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine，DSPE-PEG 2000)按照一定的质量比制备LNPs，以静电吸附的方法负载sgRNA/Cas9质粒，制备sgCLNPs。通过工艺优化和处方筛选，得到sgCLNPs的最优处方，制备的 LNPs粒径为125±0.79nm，PDI为0.087±0.32，电位为43.7±0.58mV。LNPs呈现出均一中空的球形结构，具有良好的稳定性。琼脂糖凝胶电泳吸附实验表明LNPs能够完全吸附sgRNA/Cas9并保护其完整性[1]。

史梦浩等人研究高渗透性纳米递送系统协同阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导免疫原性细胞死亡(immunogenic cell death,ICD)增强抗肿瘤疗效。方法采用薄膜分散法制备包载DOX的DOX-L纳米粒,利用其在pH为中性环境下带负电荷的共聚物聚乙二醇-聚赖氨酸-2,3-二甲基马来酸酐(mPEG-PLL-DMA,PPA)包裹在DOX-L纳米粒外层,制得DOX-PPA/L纳米粒。考察粒径、Zeta电位和包封率优化处方,且考察制剂的体外释放行为和pH敏感性。同时采用小鼠乳腺癌细胞(4T1)考察其体外抗肿瘤活性。结果，优化处方结果表明,(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵(N-[1-(2,3-dioleyloxy)propyl]-N,N,N-trimethylammonium chloride,DOTAP)与DOX的质量比为8∶1,PPA与(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵质量比为5∶1,粒径为(155.39±8.15)nm,Zeta电位为(-13.34±2.35)mV。体外实验结果表明,空白载体的生物安全性良好,pH6.8条件下的DOX-PPA/L纳米粒的细胞摄取、细胞毒性和肿瘤穿透性明显高于pH7.4条件下的制剂,验证了其pH敏感性及必要性。另外,DOX诱导ICD作用,联合纳米粒的pH敏感性,增强体外肿瘤免疫活性。结论，通过高渗透性纳米递送系统包载DOX,提高纳米粒的渗透性和肿瘤免疫治疗疗效,增强抗肿瘤作用[2]。

不同(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵/DOX质量比条件下 DOX-L 纳米粒的阿霉素包封率变化

李漂等人检测电荷修饰脂质体的理化性质,并评价其作为流感疫苗佐剂的免疫增强效果。方法以大豆卵磷脂、胆固醇、(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵[N-1-(2,3-Dioleyloxy)propyl-N,N,N-trimethylam-moniumchloride,DOTAP]与1,2-二油酰基磷脂酰胆碱(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine,DOPC)(DOTAP与DOPC质量比为 1 ∶4、2 ∶3、3 ∶2、4 ∶1)为膜材,制备4种电荷修饰的脂质体。将四价流感疫苗分别与制备的4种脂质体按1.4∶1.0的体积分数混合,通过冻融-冻干法将混合液制备为阳离子修饰的流感疫苗脂质体冻干粉。用PBS复溶脂质体冻干粉,采用激光粒度仪测定粒径及Zeta电位,Lowry法测定脂质体包封率，将231只雌性KM小鼠随机分为阴性对照组(PBS)、阳性对照组(四价疫苗原液)、阳离子脂质体组(4种电荷修饰的流感疫苗脂质体)和中性脂质体组(未经电荷修饰的流感疫苗脂质体),均经腹腔注射,0.2mL/只,免疫后7、14、28d,采用MTT法和T淋巴表面标记法评价其细胞免疫效果;免疫后3、7、14、28、42、56d,采用血凝抑制(hemagglutinin inhibition,HI)试验评价其体液免疫效果。结果，(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵与DOPC质量比为4 ∶1时,阳离子修饰脂质体的粒径和Zeta电位达最大,分别为529.65nm和12.05mV,此时包封率也较高,为81.82％。4个比例的阳离子脂质体组小鼠脾细胞的刺激指数(stimulus index,SI)及CD4+/CD8+值均明显高于阴性对照组(F=4.651～25.866,P均＜0.05),其中4 ∶1比例组的两项指标均高于其他3个比例组;且该组小鼠于免疫后3d即产生了早期体液免疫效果,免疫后42d抗体滴度达最高,在整个免疫周期内均维持较高水平。结论，不同电荷修饰的阳离子脂质体均能提高流感疫苗的免疫效果,其中(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵与1,2-二油酰基磷脂酰胆碱质量比为4 ∶1时的免疫增强效果最好,免疫效应持续时间最长[3]。