米铂中十四烷酸钠盐的测定方法及其验证

背景技术

米铂(Miriplatin,SM‑11355)是脂溶性铂类抗肿瘤药物，临床上用于治疗肝细胞癌，化学名称为顺‑[(1R,2R)‑1,2‑环己二胺‑N,N’]双十四酰氧基合铂一水合物。

十四烷酸钠盐是制备米铂的重要起始物料，十四烷酸钠盐掺杂在米铂原料药成品中，直接影响着米铂成品的纯度，因此，需要严格控制米铂中十四烷酸钠盐的含量。将现有盐酸甲醇对十四烷酸衍生化处理的检测方法用于检测米铂中的十四烷酸钠盐主要存在如下问题：由于米铂结构中含有双十四烷酸链，在酸性条件下，十四烷酸链会脱落并与甲醇反应生成十四烷酸甲酯，干扰检测，同时供试品的处理方法繁琐，仪器设备昂贵，因此采用盐酸‑甲醇对十四烷酸衍生化处理的方法不适用于米铂中十四烷酸钠盐的检测；十四烷酸钠盐的紫外吸收为末端吸收，吸收太弱，加之米铂在水中的溶解性差，因此若想要将限度控制在0.1％～0.3％，紫外检测器灵敏度不能够满足检测要求；离子色谱可以检测到阴阳离子，十四烷酸钠盐在碱性条件下可电离产生阴离子十四烷酸根，但十四烷酸根有较长的碳链会被吸附于色谱柱中，单一的碱性洗脱液无法将十四烷酸根洗脱出柱，如在洗脱液中添加乙腈，抑制器需采用外接水模式，这样不仅方法复杂同时还会降低抑制器的寿命，增加设备成本；液相色谱‑质谱联用检测方法的检测成本较高，会额外增加药品生产企业的仪器和设备成本，不利于节能和环保。

检测方法

1、溶液的配制

对照品溶液：精密称取十四烷酸钠盐对照品适量，加无水乙醇超声使溶解，用空白溶剂稀释制成每1ml中含3μg十四烷酸钠盐的溶液，作为对照品溶液。

系统适用性溶液：分别精密称取杂质B、C、D、F、G、INT2和十四烷酸钠盐对照品适量，用无水乙醇溶解并用空白溶剂稀释制成每1mL含杂质B 50μg、杂质C 50μg、杂质D 50μg、杂质F 50μg、杂质G 50μg、杂质INT2 50μg、十四烷酸钠50μg的混合溶液，作为系统适用性溶液。

杂质B、C、D、F、G、INT2和十四烷酸钠盐的定位溶液：分别精密称取杂质B、C、D、F、G、INT2和十四烷酸钠盐对照品适量，分别置于不同的量瓶中，用无水乙醇溶解并用空白溶剂稀释制成每1mL含杂质B 0.5mg、杂质C 0.5mg、杂质D 0.5mg、杂质F 0.5mg、杂质G 0.5mg、杂质INT2 0.5mg、十四烷酸钠盐0.5mg的溶液，即得各自定位溶液。

供试品溶液：精密称取供试品约15mg，置于10ml量瓶中，加无水乙醇7.5ml超声使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液作为供试品溶液。

2、高效液相色谱的条件

色谱柱：ZORBAX Eclipse plus C8(250×4.6mm，5μm)；流速：1.0mL/min；柱温，35℃；进样量：100μL；流动相A相：0.02mol/L乙酸铵水溶液，流动相B相：甲醇；蒸发光散射检测器的条件：漂移管温度为40℃，载气流量为1.5L/min，分流模式[1]。

方法验证

1、专属性

取上述空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液、杂质B、C、D、F、G、INT2和十四烷酸钠盐的定位溶液和系统适用性溶液按照提供的米铂中十四烷酸钠盐的检测条件进样检测，进样量为100μL，记录色谱图。试验结果表明，基线平稳无干扰，空白溶剂对杂质及主成分检测无干扰；各组分和各杂质之间分离度均大于1.5，杂质B、C、D、F、G、INT2在十四烷酸钠盐峰位置处无色谱峰，不干扰十四烷酸钠盐测定，说明本方法专属性良好。

2、线性范围

精密称取十四烷酸钠盐对照品约7.5mg，置10ml量瓶中，加无水乙醇超声使溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置50ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为线性贮备液，精密量取线性贮备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、6.0ml，分别置于10ml量瓶中，加水2.5ml，用无水乙醇稀释至刻度，作为线性1/2/3/4/5溶液。按照上述提供的米铂中十四烷酸钠盐的检测条件进样检测，进样量为100μL，以峰面积对数值为纵坐标，以浓度对数值为横坐标进行线性回归运算。结果：十四烷酸钠在1.4430μg/ml～8.6581μg/ml范围内，十四烷酸钠盐的浓度对数值与峰面积对数值呈良好线性关系，线性方程y＝1.9036x+8.3211，相关系数r＝0.999。

3、定量限和检测限

取配制的线性溶液，用稀释法分别测其定量限、检测限，以信噪比为3:1时的浓度为检测限，信噪比为10:1时的浓度为定量限，并将定量限溶液连续进样6次，计算峰面积的相对标准偏差、保留时间的相对标准偏差。试验结果表明，十四烷酸钠盐定量限浓度为1.150μg/ml，相当于主成分浓度的0.077％，方法灵敏度满足检测要求；定量限重复配制6次，S/N均大于10，保留时间的RSD为0.2％，峰面积的RSD为5.9％，定量限重复性良好。十四烷酸钠盐检测限浓度为0.575μg/ml，相当于主成分浓度的0.038％，S/N大于3，说明本方法灵敏度高。

4、准确度

精密称取供试品约15mg，置10ml量瓶中，分别加入配制的线性贮备液1.0ml、2.0ml、3.0ml，再分别加入无水乙醇6.5ml、5.5ml、4.5ml，超声使溶解，放至室温，用水稀释至刻度，采用聚四氟乙烯(PTFE)滤膜过滤，取滤液，即得回收率低、中、高溶液，每个浓度平行配制3份。

精密量取上述溶液各100μl，注入液相色谱仪，按照提供的米铂中十四烷酸钠盐的检测条件进样检测，记录色谱图，计算各杂质的回收率以及回收率的RSD值。

以上结果表明，9份供试品回收率均在93.2％～103.1％之间，平均回收率为99.5％，RSD为5.5％，表明方法准确度良好，满足十四烷酸钠盐测定要求[1]。

参考文献

[1] 石家庄四药有限公司. 一种米铂中十四烷酸钠的检测方法:CN202210447404.X[P]. 2023-06-09.