偏磷酸的用途

简介

偏磷酸，常温下为无色玻璃状固体物质，易吸潮，可溶于水并逐步水解生成正磷酸；它既可作为淬灭剂终止环糊精葡萄糖基转移酶催化的酶促反应，也可作为磷酸化试剂，对蔗糖硬脂酸酯进行磷酸化改性，制备磷酸化蔗糖硬脂酸酯SE-P。

偏磷酸的性状

用途

偏磷酸用作淬灭剂终止CGTase酶促反应，实现产物2-O-α-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸的高效取样分析。例如：将可溶性或固定化CGTase样品（280个单位）在40°C下与4%（w/v）β-CD、4%（w/vAANa）和0.2%（w/v硫脲在总体积为20ml的含10mM CaCl2的10mM醋酸盐缓冲液（pH 6.0）中孵育。在黑暗中连续摇晃24小时后，取200µl等分试样。将混合物与800µl 1.06%偏磷酸混合以终止反应。通过离心（1380g）10分钟收集固定化酶。通过HPLC分析反应混合物中2-O-α-吡喃葡萄糖基-L-抗坏血酸的量。分离固定化酶。用含有10mM CaCl2的50mM醋酸盐缓冲液（pH 6.0）彻底清洗固定化酶。纯化得到产物[1]。

偏磷酸还可作为磷酸化试剂，可与蔗糖硬脂酸酯（SE）经高温反应实现羟基磷酸化，用于制备磷酸化蔗糖硬脂酸酯SE-P。例如：在60°C下将SE（12.1 g）分散在200 mL蒸馏水中。向混合物中加入偏磷酸和MPA溶液（40.1 g/100 mL，用5M NaOH调节pH至5.5）（SE/MPA）1:10，摩尔比）。用0.1M氢氧化钠将pH值重新调整至5.5。将反应混合物冻干。将反应混合物在110°C下加热20小时以磷酸化。在4°C下以18000 rpm离心30分钟，用200 mL冷冻水洗涤反应产物，以消除未反应的MPA。将所得残留物冻干。在搅拌下将冻干样品溶解在200 mL氯仿/甲醇（8:2，v/v）中30分钟，以消除残留的MPA。过滤后，在氮气流下蒸发滤液以回收粗SE-P。使用Iatrobeads RS-8060柱（22内径x 200毫米）进行硅胶色谱分析。将粗SE-P加入已用氯仿/甲醇（8:2，v/v）平衡的柱中。蔗糖多硬脂酸酯后，用400mL相同溶剂洗脱除去二酯。用80mL甲醇洗脱SE-P和蔗糖单酯。减压蒸发洗脱液。用蒸馏水对混合物进行透析。将混合物冻干得到产物[2]。

参考文献

[1] Prousoontorn, Manchumas Hengsakul; et al. Production of 2-O-α-glucopyranosyl L-ascorbic acid from ascorbic acid and β-cyclodextrin using immobilized cyclodextrin glycosyltransferase. Journal of Inclusion Phenomena and Macrocyclic Chemistry (2007), 57(1-4), 39-46.

[2] Yamagishi, Yukako; et al. Improvement of the functional properties of sucrose stearate by phosphorylation. Journal of Agricultural and Food Chemistry (2004), 52(26), 8039-8045.