GAPDH Loading Control Monoclonal Antibody(GA1R)的应用

背景^[1-6]

GAPDH Loading Control Monoclonal Antibody(GA1R)是GAPDH Loading Control作为抗原对实验动物进行免疫后筛选出只产生的GAPDH Loading Control抗体的B淋巴细胞，再将B细胞通过细胞融合技术与骨髓瘤杂交然后筛选出只分泌GAPDH Loading Control抗体的杂交瘤细胞，最后通过层析柱纯化制的高纯度的GAPDH Loading Control抗体。GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是通常已知参与糖酵解的催化酶。GAPDH作为相同37-kDa亚基的四聚体存在，并且在NADPH存在下催化1,3-二磷酸甘油酸酯可逆地还原为甘油醛3-磷酸酯。除了在糖酵解中发挥关键作用外，GAPDH普遍表达并显示与其糖酵解功能无关的其他活性。

据报道，GAPDH参与DNA复制，DNA修复，核RNA输出，膜融合和微管捆绑的过程。研究提供了GAPDH在凋亡中观察到的基因表达的重要部分以及作为年龄相关神经变性疾病的细胞表型的一部分的证据。此外，GAPDH参与其他细胞过程，包括膜融合和癌症中的神经细胞凋亡。据报道，GAPDH与多种其他蛋白质结合，包括淀粉样蛋白前体蛋白，导致某些形式的阿尔茨海默病（AD）的突变，以及亨廷顿蛋白产品异常形式的亨廷顿病的多聚谷氨酰胺束。还报道了GAPDH，肌动蛋白和微管蛋白之间的关联。由于GAPDH在大多数组织中以高水平表达，因此在蛋白质印迹分析中作为蛋白质上样对照是有用的。还报道了GAPDH，肌动蛋白和微管蛋白之间的关联。

由于GAPDH在大多数组织中以高水平表达，因此在蛋白质印迹分析中作为蛋白质上样对照是有用的。还报道了GAPDH，肌动蛋白和微管蛋白之间的关联。由于GAPDH在大多数组织中以高水平表达，因此在蛋白质印迹分析中作为蛋白质上样对照是有用的。

应用^[7][8]

用于GAPDH作为原核及真核生物通用型内标蛋白的研究及相关生物技术研发。

甘油酸-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)是生物体内一类十分保守的重要多功能酶类，广泛存在于原核及真核生物体内，如大肠杆菌、酵母、秀丽线虫、大鼠和小鼠等模式生物，主要参与生物体内糖代谢中糖酵解的第六步反应，即催化甘油醛-3-磷酸转化为1,3-二磷酸甘油酸并释放出能量(ATP)的过程。生物界中GAPDH单体分子量大小在30kD-40kD之间，天然状态的GAPDH主要以四聚体形式存在，其氨基酸编码序列在原核及真核生物体内均高度保守，同源性高达76%。

原核及真核生物体内GAPDH蛋白是一类功能上十分保守的重要蛋白酶超家族，在不同的物种中分别由不同的基因编码，如微生物的gapA,gapB和gapC基因、酵母菌的TDH-1,TDH-2和TDH-3基因、秀丽线虫的gpd-1,gpd-2,gpd-3和gpd-4基因、大鼠的G3PDH基因等。不同物种中多种编码基因的存在一方面提示了不同GAPDH变体之间的功能代偿性，另一方面反映了个体应对环境压力的高度可调控性，为其作为管家蛋白的功能保守性提供了重要依据。内标蛋白是生物体内一类重要的管家蛋白，具有序列保守性高、组织分布广等特点。如常见的内标蛋白主要包括：细胞骨架蛋白肌动蛋白actin、微管蛋白Tubulin、细胞代谢相关蛋白GAPDH等。其中，GAPDH在同种细胞或组织中的蛋白表达量相对恒定，且很少受外部应激因素的影响，已被广泛用作RT-PCR和Western blot等分子生物学实验标准化的内参分子，特别是其作为内标蛋白在组织或细胞内蛋白相对表达定量中的应用。

采用不同鼠源单克隆抗体系统排查了目前常用于真核生物蛋白表达相对定量的内标蛋白，包括（3-actin，a-tubulin和GAPDH等，以期找到一个既适合于真核生物蛋白表达相对定量又适合于原核生物蛋白表达相对定量的通用型内标蛋白。结果发现，采用鼠源GAPDH单克隆抗体可特异性地检测到微生物大肠杆菌BL21(DE3)细胞中的GAPDH蛋白，并且在诱导剂异丙基|3-d-硫代半乳糖苷（isopropyl-(3-d-thiogalactoside,IPTG)存在的条件下内源性GAPDH蛋白的表达水平十分稳定，不随诱导表达时间的增加而改变。

参考文献

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[8]吴永红.GAPDH作为原核及真核生物通用型内标蛋白的研究及相关生物技术研发[D].中国人民解放军军事医学科学院,2013