西贝母碱苷的含量测定

背景及概述^[1]

伊贝母为百合科植物新疆贝母(FritilariawalujewiiRegel.)或伊犁贝母(FritillariapallidifloraSchrenk.)的干燥鳞茎，主要分布在新疆地区，具有清热润肺、化痰止咳、散结之功效，化学及现代药理研究表明，伊贝母的药效成分主要为生物碱，其中西贝母碱苷、贝母素甲、贝母素乙为主要活性生物碱，对止咳化痰具有重要的药理作用。

结构

含量测定^[1]

一种分析测定伊贝母中贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷含量的方法，利用高效液相色谱-质谱条件，具体操作按下列步骤进行：

a、高效液相色谱条件：色谱柱：赛默飞世尔HypersilGOLD,C18100×2.1mm,1.9μm；流动相体积百分比为A-0.1％甲酸水溶液，B-甲醇，按时间0min，2.0min，4.5min,4.6min,7.0min,分别用浓度为80％,45％,45％,80％,80％的0.1％甲酸水溶液和浓度为20％,55％,55％,20％,20％的甲醇溶液进行梯度洗脱，流速为0.2mL/min，柱温为室温，进样量为2μL；

b、质谱条件：离子源电压为+3000伏特；离子源温度为300℃；鞘气为30arb；辅助气为10arb；离子传输毛细管温度为300℃；电喷雾离子源，贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷的选择检测离子分别为m/z432.233，m/z430.219和m/z592.308；

c、对照品溶液的制备：

精密称取贝母素甲0.890mg，贝母素乙0.918mg，西贝母碱苷1.165mg，分别用甲醇溶解定容至1mL，作为对照品溶液储备液；

d、样品溶液的制备：

温度60℃干燥2小时的伊贝母粉末0.1g，加氨水50μL，再加体积比8:2的氯仿-甲醇溶液5.0mL，混匀，超声处理25min，称重，放置过夜，称重，加体积比8:2的氯仿-甲醇溶液补足重量，滤过，弃去滤液，精密吸取续滤液1.0mL，氮气吹干，残渣用甲醇1mL超声2min溶解，过0.2μm微孔滤膜，得到样品待测液；

e、标准曲线的绘制：

精密移取贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷对照品溶液储备液，并用流动相水∶甲醇＝80:20分别稀释104,2×104,105,2×105,106,2×106,107,2×107倍，得到混标溶液，按色谱条件进行高效液相色谱-质谱分析；以浓度对峰面积进行回归分析，得各组分标准曲线，计算回归方程；

f、含量测定：

精密吸取样品待测液，按色谱条件进行高效液相色谱-质谱分析，并将峰面积带入标准曲线，分别计算贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷的含量。

主要参考资料

[1] CN201510258155.X分析测定伊贝母中贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷含量的方法