西那普肽的制备

理化性质及结构^[1]

西那普肽，英文名：Surfaxin，Sinapultide，分子式：C126H238N26O22；分子量：2469.5；碳、氢、氮比例：C：61.28%，H：9.71%，N：14.75%。氨基酸序列：

H-Lys-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys-OH；

结构式：

西那普肽是一个人工合成的21肽，用于治疗早产儿呼吸窘迫综合征。Discovery Laboratories Inc为原研公司，于2012年3月被美国FDA 批准上市。

制备^[2]

一、制备Fmoc-Lys(Boc)-树脂

1）取2-氯-三苯基氯树脂(0.5mmol/g树脂，50mmol) 100g，用1000ml DMF浸泡30分钟，使树脂充分溶胀，加DIPEA 20ml，Fmoc-Lys(Boc)-OH 23.5g，25℃反应65分钟。再加甲醇50ml，25℃反应60分钟。

2）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

二、制备Fmoc-Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取53.0g Fmoc-Leu-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

三、制备Fmoc-Leu-Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取53.0g Fmoc-Leu-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

四、制备Fmoc-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取53.0g Fmoc-Leu-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

五、制备Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取53.0g Fmoc-Leu-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

六、制备Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取70.5g Fmoc-Lys(Boc)-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

七、制备Fmoc-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，27-29℃反应15分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

2）取74.2g Fmoc-Leu-OH、79.5g HATU、28.6g HOAt，用760ml接肽试剂溶解，加入反应容器，19-21℃反应45分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

八、制备Fmoc-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取53.0g Fmoc-Leu-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

九、制备Fmoc-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取53.0g Fmoc-Leu-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

十、制备Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu- D-Tyr (tBu)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取53.0g Fmoc-Leu-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

十一、制备Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取70.5g Fmoc-Lys(Boc)-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

十二、制备Fmoc-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取53.0g Fmoc-Leu-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

十三、制备Fmoc-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys (Boc) -树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取53.0g Fmoc-Leu-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

十四、制备Fmoc-Leu-Lue-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu -Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取53.0g Fmoc-Leu-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

十五、制备Fmoc-Leu-Lue-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu- Leu -Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取53.0g Fmoc-Leu-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

十六、制备Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Lue-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu- Leu -Leu-Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取70.5g Fmoc-Lys(Boc)-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

十七、制备Fmoc-Lue-Lys(Boc)-Leu-Lue-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu -Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取53.0g Fmoc-Leu-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

十八、制备Fmoc-Lue-Lue-Lys(Boc)-Leu-Lue-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc) -Leu -Leu-Leu- Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取53.0g Fmoc-Leu-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

十九、制备Fmoc-Lue-Lue-Lue-Lys(Boc)-Leu-Lue-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu- Lys(Boc) -Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取53.0g Fmoc-Leu-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

二十、制备Fmoc-Lue-Lue-Lue-Lue-Lys(Boc)-Leu-Lue-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu- Lys(Boc)-Leu -Leu-Leu- Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取53.0g Fmoc-Leu-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

二十一、制备Fmoc-Lys(Boc)-Lue-Lue-Lue-Lue-Lys(Boc)-Leu-Lue-Leu-Lue-Lys(Boc)-Leu- Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-树脂

1）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，抽干。

2）取70.5g Fmoc-Lys(Boc)-OH、57.0g HATU、20.5g HOAt，用520ml接肽试剂溶解，加入反应容器，0-5℃反应55分钟。

3）抽干，分别用DMF、甲醇和DMF洗涤三次，抽干。

4）加1000ml脱帽试剂，21-23℃反应18分钟，抽干，分别用DMF、甲醇和DMF各洗涤三次，甲醇洗涤六次，抽干。

二十二、制备西那普肽粗品

将保护21肽树脂转移至2000ml反应器中，加入事先配制好并预冷至约-10到-7℃的试剂（TFA/TIS=932ml/68ml），13-16℃搅拌65分钟。减压除溶剂至小体积，加入1000ml冷无水乙醚，沉淀，过滤收集沉淀，用无水乙醚洗充分后，真空干燥。得西那普肽粗品84.5g（68.8mmol），收率98.3%。

二十三、分离纯化

将西那普肽粗品溶于8.1%乙酸中，过滤，滤液经C18柱纯化，流动相：0.122Mol/L 磷酸三乙胺/乙腈＝6.9/3.1；流速为870ml/min；制备型HPLC的检测波长为：230nm；用分析型HPLC跟踪收集所需要的流出液，样品峰合并后，减压除去溶剂。再上柱去除磷酸盐，冻干，约得41.2g白色块状物成品（MW：2469.5，33.56mmol），总收率47.9%（以树脂的50mmol计），HPLC测定纯度为：99.6%。

主要参考资料

[1] 邱瑞琪，陆伟根. (2017). 西那普肽脂质体气溶胶体外评价. 中国医药工业杂志, 48(7), 1017-1021.

[2] 肖庆，刘建，马亚平. (2013). 一种西那普肽的化学合成方法. CN 102850440 A.