大鼠海绵体内皮细胞

背景^[1-7]

大鼠海绵体内皮细胞提取于大鼠海绵体组织，大鼠海绵体内皮细胞采用混合酶酶解法制备而来，细胞总量约为5×105cells/T25，细胞纯度经vWF,Factor VIII鉴定，可达85%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。大鼠海绵体内皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的大鼠海绵体内皮细胞完全培养基能提供细胞的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。

大鼠海绵体内皮细胞原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。

大鼠海绵体内皮细胞培养方法：

收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1.取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置2-3h，以稳定细胞状态。

2.待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

3.细胞传代

1)吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2)添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；

3)用吸管轻轻吹打混匀，按1:2适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4)待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

大鼠海绵体内皮细胞注意事项：

1.培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2.在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3.传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4.该细胞只可用于科研。

应用^[8][9]

大鼠海绵体内皮细胞可用于研究血管内皮生长因子转染内皮祖细胞移植对高脂血症大鼠勃起功能的影响：

VEGF基因转染内皮祖细胞移植对高脂血症大鼠阴茎海绵体局部血管再生、内皮功能的修复以及阴茎勃起功能的影响。方法:8周龄Wistar雄性大鼠,通过喂养高脂饲料,制成高脂血症动物模型,药物勃起实验证实为ED动物模型24只,随机分为3组:I组对照组、II组EPCs移植组、III组VEGF基因转染EPCs移植组。观察比较通过腺病毒将血管内皮生长因子基因转染内皮祖细胞移植于高脂血症大鼠阴茎海绵体,探讨VEGF基因转染内皮祖细胞移植对高脂血症大鼠阴茎海绵体局部血管再生、内皮功能的修复以及阴茎勃起功能的影响。

结果:(1)HE染色和免疫组化示:转染EPCs移植组和单纯ECPs移植组较空白对照血管数量增生明显,其差异具有统计学意义(P<0.01),转染EPCs移植组新生血管数量亦明显大于单纯ECPs移植组,其差异具有统计学意义(P<0.05);(2)RT-PCR及ELIASA检测法示:转染EPCs移植组大鼠海绵体局部外周血VEGF表达好于单纯ECPs移植组,其差异具有统计学意义(P<0.01),转染EPCs移植组大鼠海绵体局部外周血VEGF蛋白表达高于单纯ECPs移植组其差异具有统计学意义(P<0.05);(3)注射阿扑吗啡勃起实验发现转染EPCs移植组大鼠勃起次数大于单纯ECPs移植组与空白对照组,其差异具有统计学意义(P<0.05),单纯EPCs移植组勃起次数大于空白对照组,其差异具有统计学意义(P<0.05);(4)细胞间粘附分子-1在空白对照组中含量明显高于其他两组,与单纯EPCs移植组有统计学意义(P<0.05)。VEGF转染组含量与单纯EPCs移植组相比无统计学差异(P>0.05)。

结论:VEGF基因转染内皮祖细胞移植可促进血管性ED大鼠阴茎海绵体血管内皮功能快速修复、促进血管再生,改善阴茎海绵体血流动力学及阴茎勃起功能。

参考文献

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[9]李政含.血管内皮生长因子转染内皮祖细胞移植对高脂血症大鼠勃起功能的影响[D].山西医科大学,2016.