加尼瑞克药理作用

背景及概述^[1]

加尼瑞克由默沙东公司(在美国和加拿大被称为默克)研发、生产。2013年经中国国家食品药品监督管理总局批准在中国上市。加尼瑞克是一种促性腺激素释放激素(GnRH)的拮抗剂，是一种合成十肽，对天然生成的促性腺激素释放激素(GnRH)具有高的拮抗活性。可竞争性阻断垂体促性腺细胞上的GnRH受体，以及其后的转导通路，从而产生一种快速、可逆的促性腺激素分泌抑制作用。在辅助生殖医学控制性促排卵治疗中，用于拮抗剂方案。

结构式

药理作用^[2]

促性腺激素释放激素(GnRH)的脉冲式释放能够刺激LH和FSH的合成和分泌。卵泡期中期和后期的LH脉冲频率大约是每小时1次。这些脉冲体现在血清LH的瞬时上升。在月经中期，GnRH的大量释放造成LH激增。月经中期的LH激增能引起数个生理反应，包括：排卵、卵母细胞减数分裂恢复和黄体形成。黄体形成造成血清黄体酮水平上升，同时雌二醇水平下降。醋酸加尼瑞克是GnRH拮抗剂，可竞争性阻断垂体促性腺细胞上的GnRH受体，以及其后的转导通路。它产生一种、可逆的促性腺激素分泌抑制作用。醋酸加尼瑞克对脑垂体LH分泌的抑制作用强于对FSH的抑制作用。醋酸加尼瑞克不能引起内源性促性腺激素的释放，这与拮抗作用一致。醋酸加尼瑞克停药后48小时内，垂体LH和FSH水平可完全恢复。

适应症^[2]

在接受辅助生殖技术(ART)控制性卵巢刺激(COS)方案的妇女中使用，用于预防过早出现促黄体激素(LH)峰。

给药方法^[2]

加尼瑞克应皮下注射，是在大腿部。为防止皮下脂肪萎缩，应循环更换注射部位。如果能对患者或其伴侣给予充分指导，并可获得专家建议，可以自行注射加尼瑞克。

制备^[1]

步骤1：肽树脂1的合成

取0.15molFmoc-D-Ala和0.15molHOBt，用适量DMF溶解；另取0.15molDIC，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液，备用。取0.05mol的Fmoc-RinkAmideAM树脂(取代值约0.6mmol/g)，采用1000mL20％PIP/DMF溶液去保护25分钟，洗涤过滤得到去Fmoc的树脂。将活化后的Fmoc-D-Ala溶液加入到已去Fmoc的树脂中，室温搅拌反应6小时，抽掉反应液，DMF洗涤3次后，DCM洗涤3次，甲醇洗涤3次，每次洗涤时间为3min，得到Fmoc-D-Ala-RinkAmideAM树脂，即肽树脂1。

步骤2：加尼瑞克树脂的合成

取0.1molFmoc-Pro和0.1molHOBt，用适量DMF溶解；另取0.1molDIC，搅拌下慢慢加入，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的氨基酸溶液，备用；取0.05mol步骤1的肽树脂1，采用1000mL20％PIP/DMF溶液去保护25分钟，洗涤过滤得到去Fmoc的肽树脂1；将活化后的氨基酸溶液加入到去Fmoc的肽树脂1中，偶联反应60～300分钟，反应终点以茚三酮法检测为准，过滤洗涤，得肽树脂2，Fmoc-Pro-D-Ala-RinkAmideAM树脂。按照上述合成肽树脂2的方法将剩余氨基酸依次连接(加尼瑞克C段到N端顺序，每次连接对应获得肽树脂3、4、5、6、7、8、9)：Fmoc-Pro、Fmoc-Har(Et₂)、Fmoc-Leu、Fmoc-D-Har(Et₂)、Fmoc-Tyr(tBu)、Fmoc-Ser(tBu)、Fmoc-D-Pal、Fmoc-D-Cpa和Ac-D-Nal，获得加尼瑞克树脂，Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Har(Et₂)-Leu-Har(Et₂)-Pro-D-Ala-RinkAmideAM树脂。

步骤3：加尼瑞克粗品的制备

取步骤2制得的加尼瑞克肽树脂，加入体积百分比为90％的TFA、体积百分比为5％的EDT、余量为水组成的混合酸解液酸解(混合酸解液10mL/克加尼瑞克树脂)，搅拌均匀，室温搅拌反应3小时，反应混合物使用砂芯漏斗过滤，收集滤液，树脂再用少量TFA洗涤3次，合并滤液后减压浓缩，加入无水乙醚沉淀，再用无水乙醚洗沉淀3次，抽干、得类白色粉末即为加尼瑞克粗品，粗品纯度为82.7％。

步骤4：加尼瑞克粗品纯化

取步骤3所得加尼瑞克粗品，用纯化流动相A溶解，溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，纯化备用；采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，流动相系统为0.1％TFA/水溶液-0.1％TFA/乙腈溶液，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得加尼瑞克纯化中间体浓缩液；取加尼瑞克纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用；采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为1％醋酸/水溶液-乙腈，纯化用谱填料为10μm的反相C18，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min，采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到加尼瑞克醋酸水溶液，冷冻干燥，得加尼瑞克纯品48.1g，总收率为61.3％，分子量：1570.8，纯度：99.5％，单一杂质0.11％，未知单杂小于0.10％。

主要参考资料

[1] CN201410596912.X一种合成加尼瑞克的方法

[2] 加尼瑞克说明书